NobleRyderBC1698 Caspase-1活性檢測試劑盒Caspase-1 Activity Assay Kit

產品貨號：BC1698

產品名稱：Caspase-1活性檢測試劑盒Caspase-1 Activity Assay Kit

英文名稱：Caspase-1 Activity Assay Kit

產品規格：50T/100T/20T

Caspase-1活性檢測試劑盒 細胞凋亡

產品簡介：

檢測方法：比色法 Colorimetric

儲存條件：Store at -20℃，6 months

具體產品的參數以收到產品說明書的參數為準

NobleRyderBC1698 Caspase-1活性檢測試劑盒Caspase-1 Activity Assay Kit是參與細胞凋亡過程的蛋白酶家族，包含 10多個成員。Caspase-1是唯 yi可剪切 Ⅱ-1b 和Ⅱ-18 前體產生活性細胞因子的 caspase。Caspase-1通過剪切 BcI-XL 調節細胞凋亡，并通過對細胞因子前體的剪切來調控相關細胞因子介導的免疫炎性反應。

基于 Caspase-1 特異水解多肽底物Tyr-Val-Ala-Asp-3-nitroanilide (YVAD-pNA)，釋放的游離xiao基苯胺pNA 在405nm 有最大吸收峰。采用可見光光度比色法測定pNA而得到Caspase 活性。適用于檢測哺乳動物組織、細胞Caspase-1活性。

需自備的儀器和用品:

可見分光光度計/酶標儀、100mL 玻璃比色皿/96孔板、臺式離心機、水浴鍋/恒溫培養箱、可調式移液器、研缽/勻漿器、冰和蒸餾水。

操作步驟:

一、樣本處理(可適當調整待測樣本量，具體比例可以參考文獻)

1、培養細胞:先收集細胞到離心管，離心后棄上清;按照細胞數量(約106個)加100L試劑二(若裂解不充分可提高至 150-200L),震蕩重懸沉淀，置冰上靜置15 min,15000g4℃離心10-15min,取上清置冰上待測。

2、組織:按照組織質量(g)：試劑二體積(mL)為1:5-10的比例(建議稱取約 0.1g組織，加入1mL 試劑二)，冰浴研磨或充分剪碎，置冰上靜置15min，4℃，15000g離心10-15min，取上清置冰上待測。

測定步驟

1、可見分光光度計/酶標儀預熱 30 min 以上，調節波長至 405 nm，分光光度計蒸餾水調零。

2、標準溶液的稀釋:將5mmolpNA 標準品用標準品稀釋液稀釋至 200、100、50、25、12.5、0umol 的標準溶液備用。

注意事項:

1、由于試劑二中含有還原劑(DTT)，建議將樣品用水稀釋2倍后，用Bradford 法測定蛋白濃度，以降低 DTT對蛋白濃度測定的干擾。不建議使用BCA法測定蛋白濃度。

2、Caspase 活性測定值低最常見的原因是細胞未發生凋亡或細胞量太少，其次是觀測時間不恰當。誘導凋亡時，并非劑量越大時間越長 Caspase 活性就越高。建議設置不同劑量和時間點如 0、2、4、8、16、24小時，以檢測優良的觀察點。

3、所測樣本的值高于標準曲線上限shi，可用試劑二稀釋樣本后重新測定。

4、蓋緊 96孔板蓋子并用封口膜密封。37℃孵育，肉眼可見顏色變黃時的 OD405值約為0.2，此時即可測定。顏色變化不明顯可延長反應或過夜，但酶活性較強時，孵育時間過長將導致反應失去線性關系。

Caspase-1活性檢測試劑盒 細胞凋亡 

產品訂購信息：

BC1698 Caspase-1活性檢測試劑盒Caspase-1 Activity Assay Kit  50T/100T/20T