NobleRyder F6628 鈣熒光探針 Fluo 3-AM

產(chǎn)品貨號：F6628

產(chǎn)品名稱：鈣熒光探針 Fluo 3-AM

英文名稱：Fluo 3-AM

產(chǎn)品規(guī)格：100ug/1mg

鈣熒光探針 Fluo 3-AM 細(xì)胞功能產(chǎn)品簡介：

別名：鈣熒光探針/鈣離子探針

分子式：C51H50Cl2N2O23

分子量：1129.85

純度/級別：≥90%(HPLC)

外觀(性狀)：紅色粉末（本品為凍干粉形式，可能會粘附在管壁上，是正常現(xiàn)象，可放心使用）

儲存條件：-20℃保存，有效期1年。

具體產(chǎn)品的參數(shù)以收到產(chǎn)品說明書的參數(shù)為準(zhǔn)。

NobleRyder F6628 鈣熒光探針 Fluo 3-AM是一種可以穿透細(xì)胞膜的熒光染料。Fluo-3，AM 進(jìn)入細(xì)胞后可以被細(xì)胞內(nèi)源性酯酶剪切形成Fluo-3，從而被滯留在細(xì)胞內(nèi)。Fluo-3可以和鈣離子結(jié)合，結(jié)合鈣離子后可以產(chǎn)生較強(qiáng)的熒光，最大激發(fā)波長為506nm，最大發(fā)射波長為526nm。Fluo-3，AM 的一個(gè)重要作用是其在高通量藥物篩選中的應(yīng)用。

操作步驟（僅供參考）：

1、用DMSO溶解配制1-5mM的Fluo-3，AM母液，向 Fluo-3,AM/DMSO 溶液中加入等體積的 20%的 Pluronic F127 溶液，Pluronic F127 可以防止 Fluo-3,AM 在 HBSS 中聚合并能夠幫助其進(jìn)入細(xì)胞。（注意：不建議在 PluronicF127 中長期保存 Fluo-3,AM 溶液。PluronicF127 的量可以適當(dāng)調(diào)整，PluronicF127 和 Fluo-3,AM 一定要確保wan全溶解后才可使用。）

2、用HBSS溶液稀釋1-5mM的Fluo-3,AM母液，配制成1-5μM的Fluo-3,AM工作液（此濃度僅供參考，請根據(jù)具體實(shí)驗(yàn)要求自行調(diào)整）。

3、取出預(yù)培養(yǎng)細(xì)胞，去除培養(yǎng)基，用HBSS溶液洗滌細(xì)胞三次。

4、加入Fluo-3，AM工作液，溶液量以覆蓋細(xì)胞為準(zhǔn)。

5、37℃細(xì)胞培養(yǎng)箱孵育約10-60min。

6、去除Fluo-3，AM工作液，用HEPESbuffersaline溶液洗滌細(xì)胞三次。

7、加入含1%胎牛血清的HBSS溶液，使其覆蓋細(xì)胞，37℃細(xì)胞培養(yǎng)箱孵育約20-30min，確保AM體在細(xì)胞內(nèi)的wan全去酯化作用。

8、用激光共聚焦或熒光顯微鏡檢測細(xì)胞，激發(fā)波長480-500nm，發(fā)射波長525-530nm，如需熒光酶標(biāo)儀或流式檢測需用 HEPESbuffersaline 使細(xì)胞重懸浮，制成 1×105cells/mL 的溶液。

注意事項(xiàng)：

1、如果使用含有血清的培養(yǎng)基，血清中的酯酶會分解AM體，從而降低Fluo-3，AM進(jìn)入細(xì)胞的效果。另外，含有酚紅的培養(yǎng)基會使本底值略微偏高，所以加工作液之前，應(yīng)盡量去除培養(yǎng)基殘留。

2、關(guān)于細(xì)胞孵育時(shí)間，建議先孵育30min，看熒光效果。如果細(xì)胞死亡較多，應(yīng)縮短時(shí)間；如果熒光強(qiáng)度太弱，適當(dāng)延長時(shí)間。

鈣熒光探針 Fluo 3-AM 細(xì)胞功能產(chǎn)品訂購信息：

F6628 鈣熒光探針 Fluo 3-AM  100ug/1mg