NobleRyder H6869 潮霉素B（干粉），濕霉素乙 效高素 潮霉素B干粉，Hygromycin B

產品貨號：H6869

產品名稱：潮霉素B（干粉），濕霉素乙 效高素 潮霉素B干粉，Hygromycin B

產品規格：1g

潮霉素B干粉 農桿菌培養

產品簡介：

別名：濕霉素乙 效高素 潮霉素B干粉

英文名稱：Hygromycin B

CAS：31282-04-9

儲存條件：-20℃，有效期4年

規格：1g

外觀(性狀)：白色至淺黃色固體

純度：＞90%

來源：放線菌發酵產品

酶活/效價：≥950U/mg

溶解性：100mg/ml in Water

具體產品的參數以收到產品說明書的參數為準

NobleRyder H6869 潮霉素B（干粉），濕霉素乙 效高素 潮霉素B干粉，Hygromycin B

產品介紹

本品是潮霉素B干粉，用于細胞培養實驗溶解后過濾除菌。推薦溶劑水，PBS溶液。

說明：蛋白質合成抑制劑，可用于植物細胞培養等生化研究。

潮霉素B（Hygromycin B）是由吸水鏈霉菌（Streptomyces hygroscopicus）代謝產生的一種氨基糖苷類抗生素，通過干擾70S核糖體易位和誘導對mRNA模板的錯讀而抑制蛋白合成，從而殺死原核（如細菌）、真核（如酵母菌，真菌）和高等哺乳動物真核細胞。

大腸桿菌（ Escherichia coli.）來源的潮霉素抗性基因（hyg或hph），編碼潮霉素B磷酸轉移酶，將潮霉素B轉化成不具有生物活性的磷酸化產物，從而起到解毒作用。針對這一原理，潮霉素B是一種非常有用的選擇性標記，用來篩選和維持培養成功轉染潮霉素抗性基因的原核或者真核細胞。另外，由于作用模式的差異，常與G418，Zeocin和Blasticidin S聯合使用進行雙抗性陽性細胞株的選擇。潮霉素B還能用作抗病毒劑，因其選擇性滲透進入因病毒感染增強通透性的細胞，且具有抑制翻譯的功效。還可混合入動物飼料中起到驅蟲功能。

使用方法

1. 常用篩選濃度

注意：潮霉素B用來篩選穩轉株的工作濃度需要根據細胞類型，培養基，生長條件和細胞代謝率而變化，推薦使用濃度為50-1000μg/mL。對于第一次使用的實驗體系建議通過建立殺滅曲線（kill curve），即劑量反應性曲線，來確定最佳篩選濃度。

一般而言，哺乳動物細胞50-500μg/mL；細菌/植物細胞20-200μg/mL；真菌300-1000μg/mL。

2. 殺滅曲線的建立

注意：為了篩選得到穩定表達目的蛋白的細胞株，需要確定能夠殺死未轉染宿主細胞的抗生素最di濃度，可通過建立殺滅曲線（劑量反應曲線）來實現，至少選擇5個濃度。

1） 第一天：未轉化的細胞按照20-25%的細胞密度鋪在合適的培養板上，37℃，CO2培養過夜；注：對于需要更高密度來檢測活力的細胞，可增加接種量。

2） 根據細胞類型，設定合適范圍內的濃度梯度。以哺乳動物細胞為例，可設定50，100，250，500，750，1000μg/mL。先用去離子水或者PBS buffer按照1:10的比例將母液稀釋到5 mg/ml，然后按照下表稀釋到相應濃度的工作液。

3） 第二天：替換舊的培養基，換用新鮮配制的含有相應濃度藥物的培養基。每個濃度做三個平行孔。

4） 接下來每3-4天更換新的含藥物培養基。

5） 按照固定的周期（如每2天）進行活細胞計數來確定阻止未轉染細胞生長的恰當濃度。選擇在理想的天數（通常是7-10天）內能夠殺死絕大多數細胞的最di濃度為穩定轉染細胞篩選用的工作濃度。

3. 穩定轉染細胞的篩選

1） 轉染48h后，用含有適當濃度的潮霉素B篩選培養基來傳代細胞（直接傳代或者稀釋后傳代）。

注意：細胞處于活躍分裂狀態時抗生素的殺傷效guo最hao。則當細胞過于稠密，其效率會降低。為了得到較好的篩選xiao果，最好將細胞稀釋至豐度不超過25%。

2） 每隔3-4天更換含有藥物的篩選培養液。

3） 篩選7天后觀察并評估細胞克隆（集落）的形成情況。集落的形成可能還需要一周或者更多的時間，這取決于宿主細胞類型，轉染，以及篩選效果。

4） 挑取并轉移5-10個抗性克隆于35mm細胞培養板，繼續用含藥物的篩選培養液維持培養7天。

5） 之后更換正常培養基培養即可。

注意事項

1） 潮霉素B的抗性基因（hyg或hph）除了來自E. Coli.之外，還發現于其他的菌株，包括Streptomyces hygroscopicus和Klebsiella pneumoniae。

2） 本品為有毒化合物，避免與皮膚和眼睛接觸，請小心操作。

3） 為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

備注：產品信息可能會有優化升級。請以實際標簽信息為準。

潮霉素B干粉 農桿菌培養 

產品訂購信息：

NobleRyder H6869 潮霉素B（干粉），濕霉素乙 效高素 潮霉素B干粉，Hygromycin B 1g