諾博萊德 植物總RNA提取試劑盒

植物總 RNA 提取試劑盒FlashPure Plant Total RNA Mini Kit

目錄號：91019

產品內容

保存溫度

室溫（15 ~ 25℃）保存，有效期 12 個月。

具體產品的參數以收到產品說明書的參數為準

產品簡介

適用于提取絕大多數植物根、莖、葉、花的總RNA，RNA可直接用于RT， RT-PCR，RT-qPCR，RACE，普通轉錄組測序等。

本試劑盒是同類產品中適應性最guang泛，不但可以提取小麥、玉米、水稻、大豆、番茄、煙草、擬南芥等簡單植物，也可以提取茶樹葉片、棉花葉片、葡萄葉片、楊樹葉片、番薯葉片、花生葉片、香蕉葉片、荔枝葉片、白松葉片等多糖多酚含量一般的植物。

如果遇到果實、種子、中草藥，例如：多糖多酚巨高的作物種子（小麥/玉米/大豆/水稻）、葡萄果實、藍莓果實、百合鱗莖、土豆塊莖；或者次級代謝產物巨豐富的葛根、虎杖、雪蓮等藥用植物，請選擇R513-果實種子總RNA提取試劑盒。

產品特點

1. 無毒：免氯仿、免β-巰基乙醇！

2. 高質：28s/18s=2:1，OD260/280=2.0～2.2！

3. 高效：提取全過程僅需 20 分鐘！

注意事項

a. 自備試劑：無水乙醇。

b. 提取過程使用 RNase-Free 的吸頭；研缽用水徹di洗凈，烘箱烘干即可；

c. 樣品加入裂解液 PRL 勻漿后，可在–80℃保存一個月以上。

d. 取 RNA 樣本時，把新鮮組織樣本浸入 RNAsafe ( RNA 樣品保存液， 91115-100 ) 中，可在 37℃保存一天，在 25℃保存一周，在 4℃保存一個月，在-20℃或者–80℃長期保存。

操作步驟

提示：所有離心步驟必須在室溫（15 ~37℃）下進行。

第一次使用前，請先在漂洗液 RW 中加入無水乙醇，加入體積詳見標簽

1. 材料處理：

a．取 500 μl 裂解液 PRL，轉入 1.5 ml 離心管中，再加入 50 μl 糖酚去除劑 PAD，混勻備用。

注意：對于幼嫩的農作物葉片等簡單樣本，不加糖酚去除劑 PAD，RNA

的產量可能會提高一些。

b．液氮中研磨適量植物組織成細粉，取≤50 mg 細粉轉入上述裝有裂解

液 PRL 的 1.5 ml 離心管中,劇烈渦旋震蕩 30 sec，充分混勻。

（冬天氣溫低，37℃搖床振蕩 3 min，可增強裂解效果，提高產量）

c． 將裂解物 13,000 rpm 離心 5-10 分鐘，沉淀不能裂解的碎片。

注意：使用 1 ml 的裂解液 PRL 和 100 μl 糖酚去除劑去裂解 100 mg 樣品，RNA 產量會翻倍。

2. 小心吸取上清（一般 480 μl，注意不要吸到沉淀）轉入一個新的離心管中，加入 0.5 倍上清體積的無水乙醇（例如：480 μl 上清，加入 240 μl無水乙醇），此時可能出來沉淀，用移液器吹打混勻，不需要離心。

3. 轉移上清混合液至 RNA 吸附柱中，13,000 rpm 離心 2 min，倒棄濾液。

注：吸附柱的容積為 750 μl，如果混合液超過此體積，請分兩次上柱。

4. 加入700 μl 去蛋白液RW1，室溫放置1min , 13,000 rpm離心30 sec，倒棄濾液。

5. 加入 500 μl 漂洗液 RW, 13,000 rpm 離心 30 sec，倒棄濾液。

6. 重復步驟 5。

7. 將 RNA 吸附柱放回空收集管中，13,000 rpm 離心 2 min，除去吸附膜上殘留的乙醇。

8. 取出 RNA 吸附柱，放入 1.5 ml RNase-free 離心管中，向 RNA 吸附膜的中央懸空滴加 30~50 μl 的 RNase-free H2O，室溫放置 1 min，13,000 rpm 離心 1 min。

9. 提取的 RNA 可直接用于下游實驗，或于-70℃保存，避免 RNA 降解。

附錄：

一、免液氮直接研磨（自動研磨儀）——適用于新鮮樣本

a. 在2.0ml 液氮研磨管中加入4 mm兩粒，加600μl裂解液 ARL，

放進20 mg左右的樣本，設置65個頻率，震蕩2 min。

b. 將裂解物13,000 rpm 離心3 min，沉淀不能裂解的碎片。

二、液氮研磨（自動研磨儀）:

a. 把研磨模塊丟到液氮中預冷，直到沒有氣泡冒出視為預冷完畢。

b. 在2.0 ml液氮研磨管中放入3mm 鋼珠3粒，放進20-30mg樣本，投入液氮中預冷。

c. 把預冷好的離心管插入研磨模塊中，放進研磨儀，設置 55 個頻率， 震蕩 30~60 sec。（以北京赫得研磨儀——京 N9548 為例）

d. 研磨完成后，馬上加600μl裂解液ARL，劇烈渦旋振蕩,充分混勻。

e. 將裂解物 13,000 rpm 離心 3 min，沉淀不能裂解的碎片。

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