高效感受態細胞制備試劑盒

目錄號：30018

試劑盒組成、儲存、穩定性：

短期使用4℃，避免污染。長期保存－20℃一年有效。

具體產品的參數以收到產品說明書的參數為準

產品介紹：

1.   高效感受態細胞制備試劑盒是在傳統高效感受態細胞制備方法的基礎上進行適當改良而成，操作便捷，轉化效率高。

2.   使用本試劑盒可以使感受態效率達到10⁸ cfu/μg質粒。對于小的質粒效率略高，而對于大的質粒則效率略低一些。用本試劑盒制備的高效感受態細胞不僅可以轉化質粒，而且非常適合于轉化普通的連接產物，特別適合于轉化平端連接等需要高轉化效率的情況。

3.   使用本試劑盒操作簡單，細菌培養好后僅需60分鐘左右即可完成高效感受態細胞的制備。

4.   本試劑盒適用于絕大部分常見的大腸桿菌，包括Top 10、DH5α、BL21（DE3）、JM109、TG1、HB101和XL-1等。但是不同的菌種，轉化效率可能有很大差別。

5.   本試劑盒可以分多次使用，共可以制備100支100μl的感受態細胞。

v  注意事項：

1.          所有試劑、耗材、儀器、設備務必經過滅菌處理。

2.          在制備感受態細胞的過程中均使用不含抗生素的LB。在使用感受態菌的過程中熱休克后的37℃培養時也必須使用無抗生素的LB，即便轉入的質粒是有抗性的。

3.          感受態細胞制備完畢請快速轉入-70℃。

操作步驟：(實驗前請先閱讀注意事項)

1.   涂平板： 

為取得最佳的感受態效率，必須先把甘油菌或其它形式保存的菌種涂LB平板，并培養過夜。 

2.   接種：

取一有新鮮培養的菌種的LB平板，后續操作均在超凈臺內進行。把鑷子的頂端在70%酒精中蘸一下，并在酒精燈上略略燒一下，使鑷子的頂端處于無菌狀態。用鑷子夾取一個無菌的塑料槍頭或牙簽，從平板上挑取一個單克隆，然后把蘸有菌種的塑料槍頭或牙簽放到裝有3毫升SOB或者LB（客戶應該根據菌種不同選擇適合的培養基）的細菌培養試管內。上述操作也可以使用接種環等進行操作。 

3.   培養：

37℃約250rpm培養過夜，通常培養時間控制在16小時左右為宜。絕對不宜超過18小時。 

4.   再接種培養：

根據需要制備的高效感受態細胞的量，按照1:500的比例用新鮮培養的過夜菌接種培養。例如取100微升的新鮮過夜菌到50毫升SOB或者LB中，37℃約250rpm培養。

5.   制備感受態細胞： 

e  注意：離心機轉速和離心時間對于感受態細胞制作非常重要，不同種類的細菌最佳的轉速和離心時間不同，應該根據具體情況優化。最佳狀況是適當的轉速和離心時間讓細菌剛好離心沉淀下來，又不能太緊密，否則重懸困難，只能用力吹打才能重懸，會對細胞造成損害，影響轉化效率。

1)  在培養的細菌OD600達到0.5左右時，把培養的菌液置于冰浴中，冷卻15分鐘。注意：后續所有操作均須在4度或冰浴進行。

2)   4℃（離心機必須預先冷卻）3000-3500g離心5分鐘收集細菌，棄上清（盡量去除干凈上清，殘留越少越好）。

3)  如果離心沉淀前的菌量為50毫升，按后續操作進行，如果是其它體積則按比例換算后進行后續操作。 

4)   用10毫升預冷的高效感受態制備溶液A輕輕重懸細菌沉淀（為方便重懸，可先加少量溶液A，重懸后再加入剩余的溶液A），吹打重懸時一定要很輕柔，否則會影響效果。

5)  冰浴15分鐘。 

6)   4℃（離心機必須預先冷卻） 3000-3500g離心5－7分鐘收集細菌，棄上清。

7)   用2毫升預冷的高效感受態制備溶液B輕輕重懸細菌沉淀。吹打重懸時時一定要很輕柔，否則會影響效果。 

8)   冰浴15分鐘。 

9) 冰浴上進行分裝，可以根據需要適當分裝成50-200微升/管。 

10) 立即使用或用液氮或乙醇干冰浴速凍后-70℃保存。