蔗糖合成酶（分解方向；SS-Ⅰ）試劑盒說(shuō)明書

微量法 100 管/48 樣

正式測(cè)定前務(wù)必取 2-3 個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測(cè)定測(cè)定意義：

蔗糖是源（葉片等）光合產(chǎn)物向“庫(kù)"器官運(yùn)輸?shù)闹饕螒B(tài)。蔗糖合成酶（Sucrose Synthase, EC 2.4.1.13）是雙向反應(yīng)酶，既可催化蔗糖合成又可催化蔗糖分解，是蔗糖代謝的關(guān)鍵酶之一。研究其分解方向SS-Ⅰ的活性對(duì)于植物蔗糖降解以及淀粉合成具有重要意義。

測(cè)定原理：

SS-Ⅰ催化蔗糖和UDP 生成游離果糖和 UDPG，采用 3,5－二硝基水楊酸法測(cè)定還原糖的含量來(lái)反映酶活性的高低。

蔗糖合成酶（分解方向；SS-Ⅰ）試劑盒

組成：

試劑三：粉劑×2 支，-20℃保存；臨用前每支加入 1.2ml 試劑二充分溶解待用，現(xiàn)配現(xiàn)用；

具體產(chǎn)品的參數(shù)以收到產(chǎn)品說(shuō)明書的參數(shù)為準(zhǔn)

自備儀器和用品：

可見分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、水浴鍋、離心機(jī)、移液器、微量石英比色皿/96 孔板、研缽、冰

樣品測(cè)定的準(zhǔn)備：

按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(ml)為 1：5~10 的比例（建議稱取約 0.1g 組織，加入 1ml 提取液），進(jìn)行冰浴勻漿。8000g 4℃離心 10min，取上清，置冰上待測(cè)。

測(cè)定步驟：

1、分光光度計(jì)預(yù)熱 30min 以上，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至 540nm，蒸餾水調(diào)零。

2、加樣表(在 1.5ml 棕色EP 管中按下表依次加樣）：

混勻，30℃準(zhǔn)確水浴 30min 后，95℃水浴 10min 95℃水浴 5min 左右，冷卻至室溫

SS-Ⅰ活性計(jì)算

混勻，取 200μl 至微量石英比色皿或 96 孔板中，540nm 下測(cè)定各管吸光值。ΔA=A 測(cè)定-A 對(duì)照。每個(gè)測(cè)定管需要設(shè)一個(gè)對(duì)照管。

a. 用微量石英比色皿測(cè)定的計(jì)算公式如下

1、標(biāo)準(zhǔn)條件下測(cè)定回歸方程為 y = 0.0012x - 0.0492；x 為標(biāo)準(zhǔn)品濃度（μg/ml），y 為ΔA。

2、按照蛋白濃度計(jì)算

單位定義：每mg 組織蛋白每分鐘催化產(chǎn)生 1μg 還原糖定義為一個(gè)酶活力單位。

SS-Ⅰ活性(μg /min/mg prot)= (ΔA+0.0492) ÷0.0012×V 反總]÷(V 樣×Cpr) ÷T

=138.9×(ΔA+0.0492) ÷Cpr

3、按照樣本鮮重計(jì)算

單位定義：每g 組織每分鐘催化產(chǎn)生 1μg 還原糖定義為一個(gè)酶活力單位。

SS-Ⅰ活性(μg /min/g 鮮重) =(ΔA+0.0492) ÷0.0012×V 反總]÷(W× V 樣÷V 樣總) ÷T

=138.9×(ΔA+0.0492) ÷W

V 反總：反應(yīng)體系總體積，0.05ml； V 樣：加入樣本體積，0.01 ml；V 樣總：加入提取液體積，1 ml；T：反應(yīng)時(shí)間，30 min；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/ml；W：樣本質(zhì)量，g。

b. 用 96 孔板測(cè)定的計(jì)算公式如下

1、標(biāo)準(zhǔn)條件下測(cè)定回歸方程為 y = 0.0006x - 0.0492；x 為標(biāo)準(zhǔn)品濃度（μg/ml），y 為ΔA。

2、按照蛋白濃度計(jì)算

單位定義：每mg 組織蛋白每分鐘催化產(chǎn)生 1μg 還原糖定義為一個(gè)酶活力單位。

SS-Ⅰ活性(μg /min/mg prot)= (ΔA+0.0492) ÷0.0006×V 反總]÷(V 樣×Cpr) ÷T

=277.8×(ΔA+0.0492) ÷Cpr

3、按照樣本鮮重計(jì)算

單位定義：每g 組織每分鐘催化產(chǎn)生 1μg 還原糖定義為一個(gè)酶活力單位。

SS-Ⅰ活性(μg /min/g 鮮重) =(ΔA+0.0492) ÷0.0006×V 反總]÷(W× V 樣÷V 樣總) ÷T

=277.8×(ΔA+0.0492) ÷W

V 反總：反應(yīng)體系總體積，0.05ml； V 樣：加入樣本體積，0.01 ml；V 樣總：加入提取液體積，1 ml；T：反應(yīng)時(shí)間，30 min；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/ml；W：樣本質(zhì)量，g。

蔗糖合成酶（分解方向；SS-Ⅰ）試劑盒