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一、試劑盒概述

Annexin V-AbFluor™ 647 細胞凋亡/周期檢測試劑盒是一種用于高靈敏度檢測細胞凋亡和細胞周期的試劑盒。它通過 Annexin V 與磷脂酰絲氨酸（PS）的特異性結合，結合碘化丙啶（PI）雙染技術，實現凋亡早晚期細胞及死細胞的精準區分，適用于流式細胞術與熒光顯微鏡檢測。

二、工作原理

• 細胞凋亡過程中的 PS 外翻：在正常細胞中，PS 位于細胞膜內側，細胞凋亡時，PS 會從細胞膜內側翻轉到外側，暴露于細胞外環境。

• Annexin V 與 PS 結合：Annexin V 是一種依賴 Ca2?的磷脂結合蛋白，對 PS 具有高親和力。當細胞發生凋亡，PS 外翻至細胞膜外側時，Annexin V 可與其結合，從而識別凋亡細胞。

• PI 的染色作用：PI 是一種熒光核染料，不能穿透活細胞和早期凋亡細胞的完整細胞膜，但能透過晚期凋亡和壞死細胞的細胞膜，使細胞核染色。通過 Annexin V 和 PI 的聯合染色，可以區分活細胞、早期凋亡細胞和晚期凋亡或壞死細胞。

三、試劑盒組分及作用

• Annexin V 結合緩沖液（5×）：用于稀釋和重懸細胞，為 Annexin V 與 PS 的結合提供適宜的環境，包括適當的離子強度和 pH 值等，其成分和配比能穩定細胞狀態，減少非特異性結合。

• Annexin V-AbFluor™ 647：是 Annexin V 與 AbFluor™ 647 熒光染料的標記物。AbFluor™ 647 染料具有優異的熒光性能，其激發波長為 650nm，發射波長為 665nm，相比其他類似染料，如 Alexa Fluor 647、Cy5、DyLight™ 649 等，具有更高的熒光強度和光穩定性，能更清晰地標記凋亡細胞。

• 碘化丙啶（PI）：PI 的激發波長為 535nm，發射波長為 617nm。活細胞和早期凋亡細胞由于細胞膜完整，PI 無法進入細胞內，因此細胞核不被染色；而晚期凋亡和壞死細胞的細胞膜失去完整性，PI 可進入細胞與 DNA 結合，使細胞核發出紅色熒光。

四、檢測方法及優勢

• 流式細胞術：可快速定量分析大量細胞的凋亡情況。通過設置不同對照樣品，如陰性對照細胞（不加染料）、單染 Annexin V-AbFluor™ 647 細胞、單染 PI 細胞，調整電壓和光補償后，能準確區分四類細胞：活細胞（Annexin V-/PI-）、早期凋亡細胞（Annexin V+/PI-）、晚期凋亡細胞（Annexin V+/PI+）和壞死細胞（Annexin V-/PI+）。

• 熒光顯微鏡檢測：適用于觀察細胞的形態學變化和單個細胞的凋亡情況。對于懸浮細胞，可按照流式細胞術步驟操作后，將細胞懸液置于玻片上進行觀察；對于貼壁細胞，可在蓋玻片或培養室中培養和誘導凋亡后，加入工作液孵育，再進行觀察。

Annexin V-AbFluor™ 647 細胞凋亡/周期檢測試劑盒具有以下優勢：

• 高靈敏度和特異性：能精確區分不同階段的凋亡細胞和死細胞，對早期凋亡細胞的檢測具有很高的靈敏度。

• 雙通道檢測：Annexin V-AbFluor™ 647 和 PI 的熒光發射波長不同，可實現雙通道檢測，提供更全面的細胞凋亡信息。

• 良好的兼容性：適配主流流式細胞儀及熒光顯微鏡平臺，方便不同實驗室根據現有設備選擇使用。