選擇適合實(shí)驗(yàn)需求的正常小鼠血清需從多個(gè)維度綜合考量,包括實(shí)驗(yàn)類(lèi)型、動(dòng)物背景、血清質(zhì)量及合規(guī)性等。以下是系統(tǒng)化的選擇指南:
一、明確實(shí)驗(yàn)?zāi)康呐c需求
1.實(shí)驗(yàn)類(lèi)型與應(yīng)用場(chǎng)景
細(xì)胞培養(yǎng):需選擇熱滅活(56℃,30分鐘)或未滅活血清,需關(guān)注促細(xì)胞增殖效果(如小鼠胚胎干細(xì)胞培養(yǎng)需高純度血清)。
免疫實(shí)驗(yàn):若用于抗體封閉或阻斷,需確認(rèn)血清中無(wú)目標(biāo)抗原抗體(如檢測(cè)小鼠源性蛋白時(shí),避免使用同源血清導(dǎo)致交叉反應(yīng))。
體內(nèi)實(shí)驗(yàn):如腹腔注射、造模輔助,需選擇無(wú)內(nèi)毒素、無(wú)外源因子的血清,避免引發(fā)動(dòng)物炎癥反應(yīng)。
分子生物學(xué):用于蛋白沉淀、核酸保護(hù)等,需關(guān)注血清中的蛋白酶、核酸酶活性(選擇低活性或滅活處理的血清)。
2.物種與品系匹配
同源性優(yōu)先:小鼠實(shí)驗(yàn)原則上使用小鼠血清,避免異源血清(如牛血清)引發(fā)免疫反應(yīng)。
品系特異性:根據(jù)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物品系選擇對(duì)應(yīng)血清(如C57BL/6小鼠實(shí)驗(yàn)建議使用同品系血清,避免Balb/c等品系差異導(dǎo)致的背景干擾)。
二、血清來(lái)源與動(dòng)物背景控制
1.動(dòng)物年齡與性別
年齡:
幼鼠(4~6周齡)血清:抗體水平低,適合需要低免疫球蛋白的實(shí)驗(yàn)(如細(xì)胞培養(yǎng)初期)。
成年鼠(8~12周齡)血清:營(yíng)養(yǎng)成分與抗體含量較均衡,適用于多數(shù)常規(guī)實(shí)驗(yàn)。
老齡鼠(>18周齡)血清:可能含更多衰老相關(guān)因子,非特殊需求需謹(jǐn)慎選擇。
性別:
雌性血清:激素水平較穩(wěn)定,適合生殖系統(tǒng)相關(guān)實(shí)驗(yàn)。
雄性血清:蛋白濃度略高,適用于需要高營(yíng)養(yǎng)支持的細(xì)胞培養(yǎng)。
2.健康與飼養(yǎng)條件
SPF級(jí)標(biāo)準(zhǔn):選擇來(lái)自SPF級(jí)(無(wú)特定病原體)飼養(yǎng)環(huán)境的小鼠血清,避免細(xì)菌、病毒(如鼠痘病毒、仙臺(tái)病毒)或寄生蟲(chóng)污染(如弓形蟲(chóng))。
飼養(yǎng)周期記錄:確認(rèn)小鼠未接觸實(shí)驗(yàn)相關(guān)抗原(如未免疫過(guò)特定蛋白),避免血清中含目標(biāo)抗體干擾實(shí)驗(yàn)。
三、血清質(zhì)量控制指標(biāo)
1.關(guān)鍵理化指標(biāo)
蛋白濃度:正常小鼠血清蛋白濃度約為60~80g/L,過(guò)低可能提示采血過(guò)程溶血或稀釋,過(guò)高需確認(rèn)是否為濃縮血清。
溶血程度:肉眼觀察血清應(yīng)為淡黃色透明液體,深紅色或渾濁提示溶血(血紅蛋白>50mg/dL會(huì)影響細(xì)胞活性)。
內(nèi)毒素水平:細(xì)胞實(shí)驗(yàn)要求內(nèi)毒素≤0.1EU/mL,體內(nèi)實(shí)驗(yàn)需≤0.05EU/mL(通過(guò)鱟試劑法檢測(cè))。
2.微生物與外源因子檢測(cè)
無(wú)菌檢測(cè):需通過(guò)細(xì)菌(如大腸桿菌、葡萄球菌)、真菌(如念珠菌)培養(yǎng)驗(yàn)證(培養(yǎng)14天無(wú)菌落生長(zhǎng))。
病毒篩查:至少包含鼠肝炎病毒(MHV)、小鼠細(xì)小病毒(MPV)、乳酸脫氫酶升高病毒(LDV)等檢測(cè)(PCR或ELISA法)。
3.功能驗(yàn)證
細(xì)胞培養(yǎng)測(cè)試:接種3T3細(xì)胞等標(biāo)準(zhǔn)細(xì)胞株,觀察細(xì)胞增殖曲線(24~72小時(shí)倍增率應(yīng)≥1.5倍)及貼壁率(≥90%)。
免疫實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證:如用于ELISA封閉,需測(cè)試血清對(duì)包被抗原的非特異性結(jié)合率(應(yīng)<5%)。
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