液相色譜柱后衍生法測定維生素B2

——天津蘭博方法開發實驗室

維生素B2又稱核黃素，是維持機體正常結構與功能的必需營養物質，具有多種生理功能。維生素B2的缺乏可出現眼角炎、舌炎等一些癥狀，引起脂肪酸代謝障礙等。關于維生素B2的測定有很多方法，傳統的有微生物法、熒光法，分光光度法，現代分析方法有電化學法、化學發光法、毛細管電泳法以及液相色譜法，其中液相色譜法因其前處理簡單，樣品用量少、分析速度快而逐漸成為維生素B2的常用檢測方法。本文采用蘭博液相色譜系統，建立了檢測維生素B2的液相色譜方法，結果表明該方法簡便、準確、結果令人滿意。

1 測試條件

1.1 儀器

分析型液相色譜儀（HPLC），由AS1000自動進樣器，Lablliance Series 高壓泵、DAD檢測器和Lablliance色譜工作站組成，配一支C18 Kromasil 色譜柱( 4. 6 mm × 250 mm, 5 um)；AXM-8 Temp.柱溫箱。

美國蘭博LC6500

1.2試劑

維生素B2對照品（中國藥品生物制品檢定所），乙腈（色譜純），水為屈臣氏蒸餾水，其他試劑為分析純。

1.3對照品溶液配制

精密稱取維生素B2對照品10 mg，置1000 mL容量瓶中，加入混合溶液（冰醋酸0.5 mL與4%氫氧化鈉溶液3 mL，加水至100）適量，振搖使溶解，用上述混合溶液稀釋至刻度，搖勻，即得濃度為10 ug/mL維生素B2溶液，作為對照品溶液，備用。

1.4色譜條件：

色譜柱：Kromasil (4. 6 mm × 250 mm, 5 um)；

流動相：乙腈-0.008mol/L己烷磺酸鈉-三乙胺-冰乙酸（12:87:0.25:0.75）；

柱溫：室溫；

流速：1.0 mL/min；

檢測波長：267 nm；

進樣量：20 uL。

2測試結果：

2.1 紫外檢測波長的選擇

在200～450 nm對維生素B2對照品溶液進行波長掃描，結果表明，在267、375、444 nm處有zui大吸收，zui后選擇在267 nm處對維生素B2進行測定。標準品的液相色譜圖如圖1所示。

圖1 維生素B2對照品溶液的液相色譜圖

2.2線性關系、方法檢出限考察

以對照品溶液，分別進樣5、10、20、30、40 uL，按上述色譜條件測定峰面積，以峰面積為縱坐標，進樣量為橫坐標，繪制標準曲線，線性回歸方程為： Y = 21.7962 X + 39532，r = 0.9997。表明維生素B2進樣量在0.05～0.40 ug濃度范圍內線性關系良好。

2.3 精密度實驗

對維生素B2對照品溶液連續測定6次，以保留時間和峰面積的RSD考察儀器的精密度，褪黑素的保留時間和峰面積的RSD分別為0.48%和 1.32%。

3結論

本文采用液相色譜對維生素B2進行測定，結果顯示本方法方便、準確、精密度高，重現性好，可以滿足日常分析需要。