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上海乾思生物科技有限公司
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(原核)可溶蛋白表達服務|實驗技術服務

時間:2015/6/2閱讀:880
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關鍵詞:(原核)可溶蛋白表達服務|實驗技術服務
簡介:世界*品牌(原核)可溶蛋白表達服務|實驗技術服務原裝,質量保證,*。
(原核)可溶蛋白表達服務|實驗技術服務——pCzn1質粒+Arctic Express宿主菌低溫表達體系。
我們具備豐富的蛋白表達設計經驗及實驗操作技巧,承諾客戶不成功不收費。在獲得重組蛋白產品的同時,我們也會提供相應的原始數據和原始圖片,不需要再額外花費精力重復實驗。另一方面,我們所有的實驗數據真實可信,我們提供原始的表達菌株和克隆質粒,客戶可以依據我們的實驗報告重復我們的實驗結果。
產品品牌:(原核)可溶蛋白表達服務|實驗技術服務   http://www.。。com/goodsid/fenleiyi/2868603/1.html
實驗描述               
pCold-SUMO原核蛋白表達試劑盒所包含的原核表達載體(pCold-SUMO)是在pCold載體基礎上改造而成(HaiGene),該載體啟動子(CS Promoter)來源于南極嗜冷細菌,在低溫下(15度)才能啟動蛋白的表達。低溫下細菌生長緩慢,使得蛋白合成速度減慢,從而zui大限度的提高了蛋白正確折疊的幾率,提高了蛋白可溶性表達,增強了活性蛋白的表達比率。該表達系統所包含的SUMO tag可以極大地提高小分子量蛋白的表達量,而且進一步提高了蛋白的可溶表達幾率。同時,pCold-SUMO原核蛋白表達試劑盒配備的SUMO Protease(含 6×His 標簽)可特異性去除SUMO tag,從而得到不含任何標簽的重組蛋白。TEE 信號肽可增強冷啟動子調控下目的蛋白的高表達。BL21(DE3)Chaprone E.coli 細菌中含有分子伴侶蛋白質粒,其表達產物可協助重組蛋白正確折疊形成可溶活性蛋白。 分子伴侶蛋白質粒為氯霉素抗性(chloramphenicol,Cmr)的表達受控于四環素(tetR)操縱子。
組分名稱    數量    保存
pCold-SUMO Vector (100 ng/μl)    50 μl    -20℃
SUMO Protease (10 U/μl)     100 μl    -70℃
10XSUMO Buffer    1 ml    -20℃
3M NaCl    0.5 ml    -20℃
BL21(DE3)Chaprone E.coli    100 μl    -70℃
pCold-SUMO Primer-F    100 μl    -20℃
pCold-SUMO Primer-R    100 μl    -20℃
主要特征
冷啟動子,低溫誘導表達,zui大限度地提高蛋白地可溶性
分子伴侶可協助蛋白的正確折疊
可大大的提高蛋白表達量
*的SUMO蛋白酶可切割SUMO標簽而得到不含任何多余氨基酸的蛋白
應用
包涵體蛋白的*解決方法,提高蛋白的可溶性優化表達。
Fig . M. 中分子量蛋白Marker 1. 未誘導 
2. pET15b系統表達全菌體蛋白
3.pET15b系統表達上清液(可溶蛋白部分)
4.pCold-SUMO表達于BL21(DE3)全菌體蛋白
5.pCold-SUMO表達于BL21(DE3)上清液(可溶蛋白部分)
6.pCold-SUMO表達于BL21(DE3)chaprone全菌體蛋白
7.pCold-SUMO表達于BL21(DE3)chaprone上清液(可溶蛋白部分)
8.使用Ni-NTA Resin純化SUMO融合蛋白
9.使用SUMO酶切除SUMO tag后的目的蛋白
泳道2和3表明使用pET系統表達幾乎無可溶性蛋白表達,皆為包涵體;泳道4和5表明使用pCold-SUMO系統于BL21(DE3)菌中,可溶性蛋白表達約占40%;泳道6和7表明使用BL21(DE3)chaprone可進一步提高蛋白的可溶性表達。

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