一、RNA干擾實驗定義與核心機制

RNA干擾（RNA interference, RNAi）是一種由雙鏈RNA（dsRNA）介導的轉錄后基因沉默現象，通過特異性降解目標mRNA實現基因表達調控。其核心機制分為以下步驟：

1. dsRNA切割
   Dicer酶將長dsRNA或前體miRNA切割為21-23nt的小干擾RNA（siRNA），每條siRNA 3'端有2-3個突出堿基。

2. RISC復合物形成
   siRNA雙鏈解旋后，反義鏈（引導鏈）與Argonaute蛋白結合形成RNA誘導沉默復合物（RISC）。

3. 靶標識別與降解
   RISC通過堿基配對定位同源mRNA，在距離siRNA 3'端12個堿基處切割mRNA，導致其降解。

二、RNAi類型對比

三、RNA干擾實驗核心應用領域

1. 基因功能研究

• 高通量篩選：利用RNAi文庫系統性沉默基因，解析基因網絡。

• 信號通路解析：通過抑制特定基因觀察下游效應，如MAPK通路研究。

2. 疾病治療

• 癌癥治療：靶向KRAS、BRAF等癌基因，抑制腫瘤增殖（臨床試驗階段）。

• 抗病毒療法：抑制HBV、HCV病毒基因表達（如丙型肝炎病毒核心蛋白抑制研究）。

3. 農業應用

• 抗病蟲害作物：通過沉默害蟲關鍵基因（如Bt棉）提高抗性。

• 性狀改良：調控植物激素合成基因，延長果實保鮮期。

4. 藥物開發

• 靶點驗證：快速驗證新藥靶標有效性，如阿爾茨海默病相關基因篩選。

• RNA藥物：Onpattro（siRNA藥物）獲批治療轉甲狀腺素蛋白淀粉樣變性