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細胞保種心得

來源:上海子實生物科技有限公司   2017年03月01日 13:19  

細胞采購的運輸形式一般分為兩種,一種是直接寄送凍存細胞,一種是復蘇后寄送活細胞。前者是由液氮中取出細胞凍存管,采用干冰運輸;后者是將細胞復蘇至T-25培養瓶中,采用常溫運輸。兩者各有優缺點,*種方式的優點是可以長途運輸,因為細胞在干冰中相對穩定,一般可以保證數周之內不影響細胞活性,但缺點是運輸成本高,且細胞復蘇是很復雜的過程,如果細胞復蘇后狀態不佳,則很難界定是來源的問題還是復蘇操作的問題;而第二種方式的優點是細胞收到后可以直接通過觀察來大體了解細胞狀態,并且對運輸的要求相對較低,缺點則是只適合短途運輸,因為即便運輸時培養基中不添加血清,細胞還是會不斷增殖,當細胞長滿后,細胞的狀態會隨時間的增加而不斷變差。綜上,如果是從國外大型細胞庫采購,一般采用*種方法,既能適應長途運輸,且大型細胞庫的凍存細胞質量普遍較好,在良好的操作下復蘇成活率很高;如果是從國內細胞庫采購,則一般采用第二種方法,方便收到細胞時能較好掌握細胞狀態,并且降低運輸成本(即采購成本)。我們所大部分細胞還是從國內的細胞所(如子實生物)采購,一來質量有保證,二來又能降低采購的時間和成本;當然一些大課題還是從國外細胞庫購買細胞,這樣做出的成果更能獲得學術界的認可。    接下來分別針對兩種運輸方式來談下對新細胞的處理過程。       對于直接寄送凍存細胞的情況,首先要檢查的就是細胞收到后是否有足量剩余干冰,如果干冰不足,或是已經沒有干冰,則細胞狀態可能會收到影響,建議盡快復蘇;如果有足量干冰,建議先轉移至-80℃冰箱,于第二天按正常流程復蘇,即37℃水浴鍋中快速融解,低速離心后去除含DMSO的凍存液,換入適合細胞的新鮮培養基,輕柔吹勻后轉移至培養皿中,補足培養基;一般貼壁細胞在24h內即可觀察到細胞貼壁,從而判斷細胞狀態,懸浮細胞則復蘇后即可觀察細胞狀態。對于凍存時間較長的細胞,可能需要傳代1到2次后,細胞才會調整到正常狀態,所以細胞復蘇后如果狀態不佳,不要灰心,仍要細心培養。       對于復蘇后寄送活細胞的情況,則細胞收到后要先檢查細胞瓶是否有破損,因為一般國內細胞寄送都走的普通快遞,快遞質量魚龍混雜,細胞瓶在運輸中很有可能受到碰撞和擠壓,導致瓶體受損。如果發現細胞瓶受損,則需要盡快處理,該棄就棄。如果細胞瓶完好,則用酒精消毒瓶身,去除封口膜,然后置于37℃培養箱中靜置1-2h。待細胞穩定后,觀察細胞狀態,并及時記錄,因為很多國內細胞庫都是可以反饋細胞狀態的,如果收到時細胞狀態不佳甚至污染,是可以要求重新寄送的。細胞如沒有異常,則盡快傳代并更換適合細胞的新鮮培養基。由于新細胞一般都是*次接觸,細胞傳代過程中尤為需要注意胰酶消化時間,消化時間過短或過長都會影響細胞狀態,甚至導致細胞死亡。建議大家采用低濃度胰酶消化,消化時縮短放培養箱和觀察的間隔時間,以便盡可能找到合適的消化時間。        當然,細胞培養是很辛苦的事,整個細胞處理過程中都需要保證嚴格的無菌操作,包括對一些實驗細節,都要小心細心,才能把細胞養好。希望以上能對大家有所幫助。  上海子實生物科技有限公司

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