（1）微生物菌種原理：硝酸鹽還原反應包括兩個過程：一是在合成代謝過程中，硝酸鹽還原為亞硝酸鹽和氨，再由氨轉化為氨基酸和細胞內其它含氮化合物；二是在分解代謝過程中，硝酸鹽或亞硝酸鹽代替氧作為呼吸酶系統中的終末受氫體。硝酸鹽還原過程可因細菌不同而異。有的細菌僅使硝酸鹽還原為亞硝酸鹽，如大腸埃希菌等；有的細菌可使其還原為亞硝酸鹽和離子態的銨；有的細菌能使硝酸鹽或亞硝酸鹽還原為氮，如假單胞菌；有的細菌還可以將其還原產物在合成性代謝中*利用。
（2） 實驗方法：微生物菌種將待檢菌接種于硝酸鹽培養基(內含小倒管)中，35℃孵育1~4d。將甲、乙等量混合液(用時混合)(約0.1ml)加于試管內，立即觀察結果。
（3）結果：出現紅色為陽性反應。若加入試劑后無顏色反應，可能是：①硝酸鹽沒有被還原，試驗陰性；②硝酸鹽被還原為氨和氮等其他物質而導致假陰性結果，這時應在試管內加入少許鋅粉，如出現紅色則表明試驗確實為陰性。若仍不產生紅色，表明試驗為假陰性。
若要觀察是否有氮氣產生，可于培養基管內加1只小導管，有氣泡產生，則表示有氮氣生成。
（4）應用：本試驗廣泛用于微生物菌種鑒定。腸桿菌科細菌均能還原硝酸鹽為亞硝酸鹽;銅綠假單胞菌、嗜麥芽窄食單胞菌等假單胞菌屬均可產生氮氣;有些厭氧菌如韋榮菌等試驗也為陽性。