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干細胞傳代吹打減少氣泡的方法

來源:上海谷研實業有限公司   2017年07月27日 13:46  

1.有一些干細胞可以不用消化液就能夠吹打下來。個人認為能不用消化液是的。譬如巨噬細胞。我一直維持巨噬細胞,每次傳代都不用消化液,吹打的時候我一般會用瓶內未換的剩余舊培養液,這樣子比用新的培養基可以減少點泡沫的生成。當然這個一定要求原培養基未被污染。
2. 吹打的時候我們都知道要一點挨著一點吹,這樣子不會漏掉地方。而我每次都會首先沿著兩條對角線的方向吹打,然后再按照橫著或者是豎著吹打。這樣子就可以比較容易把細胞吹下來,因為首先細胞的各個方向都受力了,而且比較均勻,細胞比較容易下來,而且對細胞形態的維護比較好。
3.對膠頭滴管的要求。膠頭滴管頭部是做成彎曲45度角的形狀,一般都是自己用止血鉗夾住頭部在酒精燈上燒彎。我還發現,如果你吹打的時候,滴管的頭部邊緣如果是和吹打平面平行的話,反而容易產生泡沫,貼在底部吹,也容易產生泡沫,是能夠有一個角度順著你吹打的方向和滴管一致。并且稍微遠離吹打面,這樣滴管內的液體容易流出,阻力會減小,就不會產生那么多的泡沫了。
4.控制你吹打的節奏,急速地吹打會很快地產生泡沫,用力越大,越容易產生。是能夠把握住自己的力度和節奏,有條不紊的吹打。我的體會是以自己拿滴管用手的輕松程度為準,如果剛吹幾下很快就累的話,那就證明干細胞是節奏過快。吹完都不累的話那就是太慢力度也不夠。我覺得一般在吹完一遍時指頭發困會比較好。這樣的節奏能夠比較快速而且有效地完成。
本人覺得zui關鍵的操作是不要吹打到底。
培養細胞多年,避免氣泡產生要注意以下兩點:
1 吹打用的培養基不能太少,如果只有1-2mL,氣泡難以避免;
2 吸管每次打出液體后立刻深入液面下吸取液體。
在傳代的時候,急速的反復吹打肯定容易產生泡沫,這對細胞不利,所以我們要盡量避免。在操作時盡量選用較大口的吸管,吸液時先將吸管內空氣排空,再深入液面以下吸液,吹打干細胞時,盡量沿著壁吹出液體,操作輕柔,就可zui大程度避免泡沫的產生!

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