如何減少ELISA檢測試劑盒實驗中的誤差

做任何實驗，都不可能**，我們能做的就是盡zui大的努力減少實驗誤差。在ELISA試劑盒實驗操作中，誤差分有系統誤差、偶然誤差、過失誤差，而一個小小的誤差主意能夠影響到實驗，那么怎樣才能縮小實驗誤差呢？除了需要細心之外，還有一些需要重點注意的地方。 實驗室操作的基本素質和實踐經驗。能熟練操作實驗儀器、器械，具有一定總結和分析問題的能力，對實驗中出現的意外情況能及時妥善解決。

    ②：使用校對過的微量移液器，排除自然誤差。移液器準確與否對定量檢測尤為重要。
    ③：仔細閱讀說明書，嚴格按照說明書要求進行規范化操作。不同批號的試劑不可混用。值得改進的地方，反復試驗確定成立后才能改進。
    ④：洗滌*，如若洗板不*，酶結合物本底顯色會呈現假陽性。洗滌液要新鮮，現用現配，陳舊的洗滌液會出現本底增高現象，也可能出現假陽性。
    ⑤：嚴控反應時間，反應時間過長，酶失活；反應時間過短，酶結合物不能與血清中的微生物抗原抗體充分結合，生成物結構松散不牢固，容易洗掉，都可能造成假陰性。
    ⑥：注意試劑盒保存期，過保存期的試劑不能使用。
    ⑦：評估試劑的實用性，試劑的穩定與否，對準確率的高低到頭重要。在試劑啟用前，應進行陰、陽對照及樣品反復比照試驗，判定試劑符合要求后方可使用。
    ⑧：嚴格掌握顯色時間，顯色時間過短，加入終止液反應終止后，底物結合物的量過少，易出現假陰性。超過顯色要求時間后顯色，應判為假陽性，這可能與試劑本身有關。加顯色劑后立即顯色，不可報陽性，這可能是本底顯色的結果。
    ⑨：加樣要準確、快速。如果加樣不準確，酶生成物的量不能確定，直接影響顯色結果。顯色的深淺及A值的測定與加入顯色劑和終止液的量有關，所以加樣應慎重。要求在一定時間內加樣完畢的實驗，如果加樣遲緩，便出現誤差，而且試劑長時間暴露在外，尤其室溫過高時，保存期會縮短甚至失效。

而ELISA試劑盒試驗是一種敏感性高，特異性強，重復性好的實驗診斷方法。由于其試劑穩定、易保存，操作簡便，結果判斷較客觀等因素，已廣泛應用在免疫學檢驗的各領域中。ELISA檢測試劑盒是用于體外定性檢測人血清或血漿中的抗體ELISA檢測。

但是您知道嗎？如果您在實驗過程中犯了以下幾個小錯誤的話也會出現實驗誤差的哦！
一、移液器的使用，加樣（抗體）等需要準確定量的試劑時不使用排槍，經驗證明排槍很不準確，極易跳孔，不要圖便宜買低檔的tips 因為ELISA不但會放大被檢測的目的蛋白，也會放大非特異結合的雜質蛋白。
二、倍比稀釋樣品時，稀釋倍數要小于10。
三、所有的裝跟ELISA試劑盒相關試劑的容器，玻璃制品的要干烤過或者使用一次性的樹脂容器。
ELISA試劑盒除了以上幾點之外，以下的小細節也會幫您減少實驗誤差：
1.做實驗時少說話，防止唾液掉進酶標條中。
2.加入一抗二抗需要放入37°。
3.如果同時做多個板子，多個板子別羅一起；盡量少用排槍。
4.加樣時，由低濃度向高濃度加，這樣減少跳孔的幾率。
5.勤換槍頭。