ELISA試劑盒操作步驟：豬乙型腦炎抗體（JE-Ab）ELISA試劑盒

本試劑盒僅供研究使用。

實驗原理

本試劑盒應用雙抗原夾心法測定標本中豬乙型腦炎抗體（JE-Ab）表達。用純化的抗原包被

微孔板，制成固相抗原，可與樣品中乙型腦炎抗體（JE-Ab）相結合，經洗滌除去未結合的抗體和其他成分后再與HRP標記的抗原結合，形成抗原-抗體-酶標抗原復合物，經過*洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉化成藍色，并在酸的作用下轉化成終的黃色。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度（OD值），與CUTOFF值相比較，從而判定標本中豬乙型腦炎抗體（JE-Ab）的存在與否。

豬乙型腦炎抗體（JE-Ab）ELISA試劑盒操作步驟

1.編號：將樣品對應微孔按序編號，每板應設陰性對照2孔、陽性對照2孔、空白對照1孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同）

2.加樣：分別在陰、陽性對照孔中加入陰性對照、陽性對照50μl。然后在待測樣品孔先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測樣品10μl。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻，

3.溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。

4.配液：將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用

5.洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復5次，拍干。

6.加酶：每孔加入酶標試劑50μl，空白孔除外。

7.溫育：操作同3。

8.洗滌：操作同5。

9.顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色10分鐘.

10.終止：每孔加終止液50μl，終止反應（此時藍色立轉黃色）。

11.測定：以空白孔調零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）。測定應在加終止液后15分鐘以內進行。

計算和結果判定：

試驗有效性：陽性對照孔平均值≥1.00;陰性對照平均值≤0.10

臨界值（CUTOFF）計算：臨界值=陰性對照孔平均值+0.15

陰性判定：樣品OD值<臨界值（CUTOFF）者為豬乙型腦炎抗體（JE-Ab）陰性

陽性判定：樣品OD值≥臨界值（CUTOFF）者為豬乙型腦炎抗體（JE-Ab）陽性。

注意事項

1．操作嚴格按照豬乙型腦炎抗體（JE-Ab）ELISA試劑盒說明書進行，本試劑不同批號組分不得混用。

2．試劑盒從冷藏環境中取出應在室溫平衡15-30分鐘后方可使用，酶標包被板開封后如未用完，板條應裝入密封袋中保存。

3．濃洗滌液可能會有結晶析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶，洗滌時不影響結果。

4．封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。

5．底物請避光保存。

6．試驗結果判定必須以酶標儀讀數為準，使用雙波長檢測時，參考波長為630nm

7．所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。終止液為2M的硫酸，使用時必須

注意安全。

保存條件及有效期

1．試劑盒保存：2-8℃。

2．有效期：6個月