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說說高質(zhì)量培養(yǎng)基的實驗操作步驟

來源:默克生命科學-默克化工技術(上海)有限公司   2020年11月25日 18:43  
  高質(zhì)量培養(yǎng)基是用于人類多能干細胞的培養(yǎng)基,它沒有外來動物成分,化學成分清晰,并且適合無滋養(yǎng)細胞培養(yǎng)。該產(chǎn)品適用于系統(tǒng)中培養(yǎng)的干細胞,可用于干細胞傳代。它含有防止細胞凋亡和分化的干細胞保護因子,并對細胞具有良好的保護作用。
  1、不需要滋養(yǎng)細胞。
  2、成分清晰,批次之間的差異很小。
  3、適用于在Essential8系統(tǒng)中培養(yǎng)的人多能干細胞。
  4、不含外來動物成分,大大降低了各種病毒,霉菌和支原體污染的風險。
 

高質(zhì)量培養(yǎng)基

  高質(zhì)量培養(yǎng)基實驗操作步驟:
  1、基質(zhì)膠包被的培養(yǎng)板:取出6孔板/12孔板,并加入1mL/0.5mL即用型基質(zhì)膠(AC-1001007)移至每個孔,輕輕搖動6孔板/12孔板,使Matrigel*覆蓋培養(yǎng)皿的底部。將其置于37℃的恒溫箱中,保溫1h?2h。實驗前將其取出,并放在干凈的工作臺/生物安全柜中以在室溫下平衡。20分鐘如果暫時不使用,可以用Parafilm密封并在2-8°C下保存并在1周內(nèi)使用。
  注意:①冷凍的干細胞數(shù)量約為1×106細胞/mL,相當于6孔板中的1個孔;②即用型基質(zhì)膠對溫度敏感,因此請在使用后立即拿走,并在使用后立即放回原處。儲存在4°C的冰箱中,不要接觸Matrigel液面的瓶體直接接觸,將影響基質(zhì)膠的質(zhì)量。
  2、首先將2?3mL干細胞培養(yǎng)基添加到15mL離心管中,以備后用。
  3、解凍:將從液氮中取出的冷凍保存管快速浸入37℃的溫水中,并迅速搖動使其在1?2min內(nèi)解凍;注意:應迅速從液氮中取出電池,以盡量減少其暴露于室溫的時間。
  4、離心:將凍存管中的凍存溶液解凍后,滴加到裝有干細胞培養(yǎng)基的15mL離心管中。將15mL離心管放入低速離心機中,然后以1200rpm離心。3分鐘;
  5、重懸:離心后,棄去上清液,加入1mL人多能干細胞培養(yǎng)基移液,吸干細胞沉淀約3至5次。
  6、接種:均勻吹吸后,丟棄已平衡的即用型基質(zhì)膠,將均勻吹干的干細胞懸液加入包被的6孔板中,并在每個孔中填充2mL訓練系統(tǒng)。
  7、高質(zhì)量培養(yǎng)基培養(yǎng):可將接種的6孔板置于倒置相差顯微鏡下,觀察接種的干細胞的密度和細胞團的大小。超過4個細胞的團塊更合格。水平的十字架很輕。搖動6孔板/12孔板以均勻分布細胞。在37°C和5%CO2的恒溫培養(yǎng)箱中孵育。第二天觀察細胞的粘附;
  8、更換培養(yǎng)基:從復蘇開始每隔24小時更換一次培養(yǎng)基。

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