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實際科研應用時抗體怎么選擇?

來源:武漢菲恩生物科技有限公司   2021年04月27日 13:36  

抗體屬于異質化產品,不同品牌之間,相同品牌不同產品之間,抗體品質差異都較為明顯,沒有統一的衡量標準。Nature多次發文指出:由于品牌、批次、生產方式、實驗條件等差異,抗體具有嚴重的多態性,易導致重復性問題。2012年,來自著名生物醫藥公司Amgen的科學家Glenn Begley領導了一次關于可再現性的研究。他們挑選了53份具有“標志性意義”的癌癥前臨床研究論文,試圖重復出這些研究成果。結果卻令人大失所望:僅有6份論文(11%)的研究成果被重復出來。數據表明,這些癌癥研究都使用了抗體產品,而抗體的差異性和不可靠性正是導致這些研究成果無法被復制的主要原因。
鑒于抗體驗證的必要性和迫切性,國際上,很多組織機構提出了一些卓有成效的措施以指導抗體驗證,匯總起來主要是以下幾種方案:利用CRISPR或RNAi等技術敲除或降低目標基因的表達;將免疫捕獲與MS分析相結合,以確定與純化的抗體直接作用的蛋白質;發展結構更明確的重組抗體以取代單克隆抗體和多克隆抗體等。
抗體驗證工作是一項長期而艱巨的任務,需要行業整體持續的努力。而具體到每個抗體試劑使用者,當我們在實驗中需要檢測目的蛋白在組織中的表達情況的時候,如何選擇適合我們實驗需要的抗體,并妥善保存使用,是每個科研人員需要細心考慮的。
檢測任何目的靶蛋白的抗體都不止一種,如何篩選出我們需要的抗體,主要有以下幾個步驟:首先我們需要確定抗體名稱,注意中英文名稱和別名、背景信息;其次我們需要分析樣本中目的蛋白的結構性質,根據蛋白本身結構域的信息和樣本預處理過程中發生的可能變化,判斷所選抗體需識別的表位區域和被驗證的具體實驗應用,如WB、IHC、ICC、ELISA、FCM等;然后還需要分析抗體的種屬反應特異性,一般抗體說明書都會列出已經驗證過的種屬信息,如可用于rat、mouse、human、pig、goat等;最后,在含有二抗的實驗體系中,一抗種屬來源的選擇,應與實驗種屬親緣性越遠越好,以減少同源性造成的交叉反應。

 

除此之外,二抗應來源于抗一抗的物種,比如一抗來源于兔,那么二抗就應選擇抗兔的。二抗標記方式通常有偶聯HRP、AP、Biotin、熒光素等,應根據所需開展的實驗選擇合適標記方式的二抗。

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