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自動蒸汽滅菌器使用前應先檢查滅菌鍋內的水位，應當浸沒加熱圈并不要高于套桶底部，若水量不足請加入蒸餾水或去離子水使得加熱圈被浸沒；若不慎加入過量的水，請使用底下帶有綠色扳手的排液閥排出多余的水后使水位合適。滅菌鍋在使用以前排液閥必須關閉。其次檢查左側下方排氣管，使其浸在水盆里，并確保管口一定浸在水面以下。
自動蒸汽滅菌器滅菌操作：
1.放入要進行高壓滅菌的物品，將物品放入滅菌金屬筐內，再放入滅菌鍋內進行滅菌。將頂蓋轉到滅菌鍋正上方并旋緊。
2.關上安全閥。
3.打開電源，設定溫度、時間后并按SET鍵確認。
4.按START鍵開始高壓滅菌。
5.滅菌結束，滅菌鍋開始發出警報聲，待溫度降低到80°C仔細檢查壓力表讀數是否為零，確認為零則關閉總電源后可以開啟頂蓋，開啟時操作者應頭部略微后仰。開蓋后可以先讓鍋內物品稍微冷卻后再取出。
6.若由于非常規原因導致滅菌異常終止請使用安全閥放空鍋內高壓蒸汽，待壓力表讀數為零后可以打開頂蓋。
自動蒸汽滅菌器任何時候當壓力表顯示壓力不為零絕對不能打開滅菌鍋頂蓋。任何時候滅菌前請注意：滅菌鍋內的水位是否合適，是否浸沒加熱圈；頂蓋是否已經蓋緊；安全閥是否已關閉；左側下方排氣管是否浸在水面以下。長期使用或者受到污染的滅菌鍋應當用蒸餾水或去離子水進行清洗，使用底下排液閥將清洗液排出，再加入蒸餾水或去離子水到適當的位置備用。滅菌時至少要留出約占容器1/4體積的空間，這樣沸騰的液體就不會溢出。滅菌時要把容器的蓋子松開，防止容器內壓力過大，致使容器破裂。取出滅好菌的容器前要擰緊容器的蓋子，否則與空氣接觸容器內染菌。
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