讓專業人士告訴你純化磁珠的試驗操作步驟

來源：深圳艾維迪泰生物科技有限公司 2022年03月07日 16:49

　　純化磁珠適合于從各種PCR產物或酶促反應液中高通量快速地回收100bp~50kb的DNA/RNA的片段，回收效率高達80%。能有效地去除PCR產物或酶促反應液中的寡聚核甘酸、引物二聚體、鹽、蛋白質等污染。

　　純化磁珠的操作步驟：

　　自備試劑：

　　洗滌液：85%乙醇；

　　洗脫液：BufferEB(10mMTris-HCl，pH8.0)或去離子水(pH在7.0~8.0之間)。

　　磁力架：(建議使用深圳艾維迪泰生物科技有限公司針對200μLPCR管磁力架，貨號：BMB32-0.2)

　　實驗步驟：

　　1.充分混合震蕩磁珠，使管內磁珠*均勻懸浮起來。

　　2.向樣品管(可使用200μLPCR管或96孔板)中加入待純化的DNA樣品溶液。

　　3.取1.8×樣品體積的磁珠溶液加入樣品管中，漩渦震蕩5秒后，室溫靜止結合5min。

　　注：放置期間如出現磁珠沉降現象應及時顛倒或者旋窩混勻，以保證磁珠處于懸浮狀態。

　　4.將樣品管置于磁力架上2min左右或待磁珠被磁力架裝置*吸附，保持樣品管在磁力架上靜止，用移液槍吸取上清并棄掉，操作過程中避免觸碰到磁珠團。

　　5.保持樣品管在磁力架上，向管內慢慢加入300μL85%乙醇，保持樣品管不離開磁力架以及磁珠團始終被吸附在管壁上，禁止分散開。

　　6.將樣品管置于磁力架上2min左右或待磁珠被磁力架*吸附，保持樣品管在磁力架上靜止，用移液槍吸取上清并棄掉，操作過程中避免觸碰到磁珠團。

　　7.重復步驟5~6，將管內的液體全部吸除干凈。

　　8.將樣品管從磁力架上取出，于室溫放置3~5min，使殘留乙醇充分揮發。

　　注：避免真空干燥，磁珠過于干燥將會降低DNA/RNA洗脫效率。

　　9.向管內加入20~100μL洗脫液，并用移液槍輕輕吹打5-10次，使磁珠重懸混勻，操作過程中應避免產生氣泡。

　　10.室溫放置5min以充分洗脫。

　　注：為了提高洗脫效率，放置期間如出現磁珠沉降現象應及時顛倒或者旋窩混勻，以保證

　　磁珠處于懸浮狀態。

　　11.將洗脫樣品管放回磁力架上2min或待所有磁珠都被磁力架裝置*吸附。

　　12.小心地將洗脫上清轉移到新的滅過菌的管子中，在轉移過程不要碰到磁珠，如出現磁珠懸起現象請重復步驟11~12。

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