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葉綠素儀是通過兩種光來檢測葉綠素含量的，在兩個不同波長區域，葉綠素對光吸收是不相同的，在這兩個不同波長區域下，根據光通過葉片傳輸數量的不同進行葉綠素相對含量的計算。兩個LED光源發射兩種光，一種是紅光，一種是紅外線，兩種光穿透葉片，打到接收器上，光信號轉換成模擬信號，模擬信號被放大器放大，由模擬/數字轉換器轉換成數字信號，數字信號被微處理器處理，計算出葉綠素值并顯示。
有關葉綠素a的測定過程可能要用到分光光度計、天平、研缽、棕色容量瓶、小漏斗、定量濾紙、吸水紙、擦境紙、滴管等儀器。準備幾片新鮮的植物葉片，準備96%的乙醇、石英砂和碳酸鈣粉，具體操作步驟如下：
取新鮮植物葉片(或其它綠色組織)或干材料，擦凈組織表面污物，去除中脈剪碎。稱取剪碎的新鮮樣品2g，放入研缽中，加少量石英砂和碳酸鈣粉及3mL95％乙醇，研成均漿，再加乙醇10mL，繼續研磨至組織變白。靜置3-5min。取濾紙1張置于漏斗中，用乙醇濕潤，沿玻棒把提取液倒入漏斗，濾液流至100mL棕色容量瓶中；用少量乙醇沖洗研缽、研棒及殘渣數次，后連同殘渣一起倒入漏斗中。用滴管吸取乙醇，將濾紙上的葉綠體色素全部洗入容量瓶中。直至濾紙和殘渣中無綠色為止。后用乙醇定容至100mL，搖勻。取葉綠體色素提取液在波長665nm、645nm和652nm下測定吸光度，以95％乙醇為空白對照。
然后根據資料上提供的葉綠素a的計算方法，就可算出新鮮的植物葉片葉綠素a的含量。具體公式如下：
葉綠素a=（12.7A665-2.69A645）·(V/1000W)；
葉綠素b=（12.7A645-2.69A665）·(V/1000W)；
總葉綠素a=（20.0A645+8.02A665）·(V/1000W)或總葉綠素a=（A652/34.5）·(V/1000W)。
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