293細胞系作為常用的表達外源基因的細胞株，由于具有容易轉染，生產(chǎn)速度快，瞬時表達力強等優(yōu)勢，生物制藥企業(yè)通常利用HEK293細胞株在微載體生物反應器中規(guī)模化生產(chǎn)抗體類藥物。

     生物制藥領域用HEK293細胞生產(chǎn)抗體藥物雖具有較多優(yōu)勢，但也存在缺陷，此類細胞無論是表達 E1A蛋白的HEK293A 系列還是慢病毒HEK 293FT細胞都存在著細胞貼壁性弱，產(chǎn)出率低的致命缺陷。

這就要求我們在培養(yǎng)HEK293細胞時嚴格遵相關的操作規(guī)程。在生物反應器中培養(yǎng)HEK293細胞系，有以下幾個方面需要注意：

一、選擇合適的培養(yǎng)基和補料

培養(yǎng)基是進行細胞培養(yǎng)的基礎營養(yǎng)物質(zhì)，HEK293原代細胞主要來源于人胚腎細胞其形態(tài)類似于上皮細胞，所選用的培養(yǎng)基一般為MEM等動物細胞培養(yǎng)基。OPM-CD Trans293培養(yǎng)基由于不含生長因子和蛋白質(zhì)也是不錯的選擇。OPM-293 ProFeed補料也有提高轉染產(chǎn)物表達效果的作用，可與OPM-CD Trans293培養(yǎng)基配合使用。合適的培養(yǎng)基、補料是保持393細胞良好生長的必要條件。

二、細胞轉染效率

細胞轉染后的陽性細胞比例不僅決定著細胞的轉染效率同時也決定著抗體的產(chǎn)能，所以提高轉染后的陽性細胞比例是HEK293細胞細胞培養(yǎng)的關鍵。細胞轉染前要保證傳代細胞95%以上的存活率，傳代頻率大概控制在 3d/天，傳代細胞密度一般維持在3~4×10^6 cells/ mL左右轉染時可用新鮮的培養(yǎng)基稀釋到合適的細胞密度有利于提升細胞轉染效率。

三、細胞生長的環(huán)境條件

細胞培養(yǎng)過程中，細胞內(nèi)毒素會嚴重阻礙細胞生長，甚至造成細胞凋亡，作業(yè)過程中設法減少轉染載體溶液內(nèi)毒素殘留是提高細胞存活率，加快細胞生長速度的重要手段之一。 另外，在細胞表達時通過生物反應器溫度控制系統(tǒng)調(diào)整適宜的培養(yǎng)溫度，也有益于增加轉化產(chǎn)物，從而提高細胞產(chǎn)物的總產(chǎn)量。

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