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PCR擴(kuò)增儀的原理及擴(kuò)增實驗中存在的問題

來源:蘇州阿爾法生物實驗器材有限公司   2022年07月22日 18:11  

標(biāo)簽:pcr擴(kuò)增 熒光定量pcr  定量pcr  pcr儀 pcr實驗室  PCR擴(kuò)增儀 基因擴(kuò)增儀

PCR檢測方法有很多,其中PCR擴(kuò)增儀又稱為“PCR儀”,它是PCR實驗中*的實驗室設(shè)備之一。PCR儀器大致可以分為三類:即:普通PCR儀,熒光定量PCR,梯度PCR原位PCR儀等。 

一、PCR的原理 

在pcr擴(kuò)增實驗中,PCR反應(yīng)過程實質(zhì)就是DNA按模板復(fù)制而發(fā)生的聚合酶鏈反應(yīng)的過程,主要包括引物、dNTP、DNA靶序列、DNA聚合及PH緩沖液體系。

PCR擴(kuò)增

  

PCR反應(yīng)過程如下

1.通過升溫反應(yīng)體系混合物一般為:94/15s-30s.使目標(biāo)DNA雙螺旋的氫鍵產(chǎn)生斷裂從而形成單鏈DNA作為合成模板.

2、反應(yīng)體系冷卻至引物的TM值左右,使引物與單鏈DNA模板產(chǎn)生互補結(jié)合,從而實現(xiàn)DNA的互補擴(kuò)增,這一過程也被稱之為退火。

3、擴(kuò)增延伸

PCR擴(kuò)增過程中,當(dāng)反應(yīng)體系的溫度高到72 ℃左右時,引物在TAQ聚合酶的作用下,以引物為起點dNTP作為底物合成新的DNA。

 以上步驟重復(fù)循環(huán),直擴(kuò)增量達(dá)到基因檢測的所需要數(shù)量即可停止循環(huán)。

使用PCR擴(kuò)增儀進(jìn)行PCR反應(yīng)過程中常見的問題:

無明顯的擴(kuò)增條帶

這種情況主要是由于以下情況產(chǎn)生: 

1Taq酶失活或Taq酶活性加入量少所造成。DNA聚合Taq酶的保存溫度一般在-20℃環(huán)境下,盡量避免反復(fù)凍融所產(chǎn)生的影響。

2混合模板反應(yīng)體系中如果含有甲酸、甲醛等雜質(zhì)也會對DNA鏈上的堿基造成影響,降低PCR擴(kuò)增效果。

3PCR儀的各反應(yīng)階段適宜溫度設(shè)定也很重要,過高或低的反應(yīng)溫度,都會使DNA聚合酶產(chǎn)生失活。

4引物設(shè)置不合理或反應(yīng)系統(tǒng)中蛋白酶及核酸酶,這些因素也同樣會影響到DNA的合成與產(chǎn)出。

 5另外,PCR循環(huán)數(shù)不足或者延伸擴(kuò)增時間短也會影響到PCR產(chǎn)物產(chǎn)量。

PCR擴(kuò)增

蘇州阿爾法生物實驗器材有限公司13年專注生物實驗室儀器設(shè)備和試劑耗材 的綜合供應(yīng)包括PCR擴(kuò)增儀、熒光定量PCR 、PCR檢測儀、振蕩培養(yǎng)箱、生物發(fā)酵罐、移液器等 ,廣泛應(yīng)用于生命科學(xué)、生物制藥、防疫檢測 、 科研等領(lǐng)域;以服務(wù)取勝,以高性價比吸睛,阿爾法從售前到售后,打造實驗室儀器設(shè)備全服務(wù)鏈體系,滿足客戶應(yīng)用需求。


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