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一文帶你了解什么是離子交換色譜

來源:上海漢堯儀器設(shè)備有限公司   2022年08月10日 10:44  
  利用分析樣品和填料中導(dǎo)入的離子交換基團(tuán)之間的靜電相互作用的差異的分離模式。根據(jù)離子交換官能團(tuán)的電荷不同,可分為陰離子交換色譜和陽離子交換色譜。陰離子交換色譜用填料中,導(dǎo)入了陽離子性的叔氨基或季銨基等;陽離子交換色譜用填料中,導(dǎo)入了陰離子性的磺酸基或羧基等。蛋白的靜電性質(zhì)隨pH值的變化而發(fā)生變化。正負(fù)電荷正好平衡時,整體不帶電荷的固有pH值稱為等電點(diǎn)(表示為PI)。在更低pH值時,整體帶正電荷;更高pH值時,整體帶負(fù)電荷。
  因此在陰離子交換色譜中,用pH值略高于(+0.5至+1.0)等電點(diǎn)的流動相;在陽離子交換色譜中,用pH值略低于(-0.5至-1.0)等電點(diǎn)的流動相作為分離條件優(yōu)化的初始起點(diǎn)。
  與填料靜電結(jié)合的分析樣品一般使用鹽濃度梯度洗脫法進(jìn)行洗脫。增加流動相的離子強(qiáng)度(鹽濃度)時,靜電相互作用會逐漸減弱。當(dāng)與離子交換基的靜電結(jié)合斷開時,分析樣品會在色譜柱內(nèi)移動,如下圖。由于分析樣品不同,脫離填料時的鹽濃度也就不同。因此,樣品中等電點(diǎn)不同的組分就在不同時間被洗脫而分離開。由于蛋白的靜電性質(zhì)隨pH值的變化而變化,因此,也可以通過改變pH值進(jìn)行分離(稱為pH梯度洗脫法)。
  離子交換色譜具有分辨率高、吸附量大(載量高)等特點(diǎn)。并且,通過調(diào)整梯度洗脫的梯度,可以輕松調(diào)控或優(yōu)化分離。

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