Dewetting孔去濕現象

      在方法開發時需要考慮的一個重要因素就是固定相的“孔去濕”。當固定相為高疏水（如C18），且流動相從一個高有機相組分（>40%乙腈或甲醇）變到另一個純水相或高水相組分的時候，就容易發生。這也是早期反相色譜柱常常遇到的問題。

      色譜柱在高壓條件下，流動相中的水會被“壓入”起保留作用的固定相孔結構里；當泵停止后，水則不會再進入固定相孔內。同時，由于固定相是疏水的，滯留于色譜柱中的水被從固定相孔結構中排出。在重啟色譜泵后，即使是高壓也無法使流動相中的水重新回到固定相孔內，從而導致樣品的保留時間迅速變短，分離度明顯下降。

      暫無研究表明純水/高水會導致碳鏈倒塌，孔去濕的主要原因填料孔表面的疏水性。發生孔去濕現象的色譜柱，在經過40%以上有機溶劑長時間沖洗后，是可以恢復的。

      孔去濕現象的發生跟填料孔徑、鍵合密度和鍵合相都有關系，除了HALO C18，HALO其他所有固定相都能在水相條件下使用，不會發生“孔去濕”現象。

      下方圖M演示了當HALO C18發生“孔去濕”現象時色譜峰的變化。相比之下，HALO AQ-C18所具有的極性特征會保護它防止發生“孔去濕”現象，如圖 M 所示，泵重啟前后，HALO AQ-C18的保留和分離基本保持不變。