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使用熒光分光光度計(jì),不是你想的這么簡(jiǎn)單!

來(lái)源:天津市能譜科技有限公司   2022年11月16日 17:45  
  熒光分光光度計(jì)定量分析時(shí)多采用工作曲線法,即以已知量的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì),按試樣相同方法處理后,配成一系列標(biāo)準(zhǔn)溶液,測(cè)定其相對(duì)熒光強(qiáng)度和空白溶液的相對(duì)熒光強(qiáng)度,扣除空白值后,以熒光強(qiáng)度為縱坐標(biāo),標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度為橫坐標(biāo),繪制工作曲線。
  
  然后將處理后的試樣配成一定濃度的溶液,在同一條件下測(cè)定其相對(duì)熒光強(qiáng)度,扣除空白值后,從工作曲線上求出熒光物質(zhì)的含量。
  
  在熒光分光光度計(jì)用熒光分析法測(cè)定某些會(huì)引起熒光改變的微量物質(zhì)時(shí),常采用差示熒光法,可使熒光強(qiáng)度的讀數(shù)差距拉大,使熒光強(qiáng)度的降低加大,從而提高方法的靈敏度和準(zhǔn)確度。
  
  在使用時(shí)需要注意開機(jī)次序,光度計(jì)開機(jī)順序一般為先開氙燈,然后開儀器主機(jī),接著開跟儀器連接的計(jì)算機(jī)。如此操作的原因在于穩(wěn)態(tài)氙燈是高壓點(diǎn)亮,為了避免瞬問(wèn)脈沖電流對(duì)周圍設(shè)備造成影響,需要先開氙燈,等電流穩(wěn)定后再打開周邊的電腦等設(shè)備。關(guān)機(jī)順序則相反。
  
  熒光分光光度計(jì)使用注意事項(xiàng):
  
  1、樣品應(yīng)盛在四面透光的石英比色皿(熒光池)中,如果是揮發(fā)性樣品應(yīng)使用帶塞的熒光池。
  
  2、在使用儀器進(jìn)行熒光分析時(shí),為了得到穩(wěn)定可靠的數(shù)據(jù),一般需要開機(jī)預(yù)熱氙燈大約30分鐘。如果儀器光源采用的是閃爍氙燈,預(yù)熱時(shí)間可以縮短到10分鐘左右。對(duì)某些易感光、易分解的熒光物質(zhì),盡量采用長(zhǎng)波長(zhǎng)、低人射光強(qiáng)度及短時(shí)間光照。
  
  3、溫度變化可引起儀器熒光強(qiáng)度的改變。通常降低溫度,有利于提高熒光量子產(chǎn)率,熒光強(qiáng)度增大。溫度影響熒光強(qiáng)度的明顯程度因樣品而異,大部分熒光物質(zhì)的熒光強(qiáng)度受溫度影響不大,測(cè)試溫度變化不超過(guò)±3℃,對(duì)測(cè)試結(jié)果幾乎無(wú)影響。
  
  4、當(dāng)儀器的熒光物質(zhì)是弱酸或弱堿時(shí),溶液的pH對(duì)熒光強(qiáng)度有較大影響。因?yàn)槿跛峄蛉鯄A在不同酸度中,分子和離子的電離平衡會(huì)發(fā)生改變,而熒光物質(zhì)的熒光強(qiáng)度會(huì)因其離解狀態(tài)發(fā)生改變。
  
  5、熒光分光光度計(jì)的熒光物質(zhì)分子與溶液中其它物質(zhì)分子之間作用導(dǎo)致熒光強(qiáng)度降低,常見的熒光猝滅劑,如鹵素離子、重金屬離子、02、硝基化物質(zhì)、重氮化合物等。
  
  溶液中的溶解氧也能引起幾乎所有的熒光物質(zhì)產(chǎn)生不同程度的熒光熄滅現(xiàn)象,因此在較嚴(yán)格的熒光實(shí)驗(yàn)中必須除氧。

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