磷酸化蛋白提取試劑盒的使用說明

來源：北京索萊寶科技有限公司 2022年11月26日 09:29

　　磷酸化蛋白提取試劑盒適用于從各種原代或傳代細胞和各種實體組織，如腦、脊髓、神經結或纖維、脂肪、肝臟、消化道、腎臟、心臟、肌肉、血管、結締組織等哺乳動物組織中提取磷酸化蛋白。磷酸化蛋白提取試劑盒含有的蛋白酶抑制劑混合物，阻止了蛋白酶對蛋白的降解，為提取高純度的蛋白提供了保證。

　　操作方法：

　　1、組織總蛋白的提取

　　(1)在1ml的冷裂解液中各加入10ul的***酸酶抑制劑、蛋白酶抑制劑和PMSF混勻，放置在冰上備用;

　　(2)稱取0.1g的新鮮組織，放置于玻璃勻漿器的入口緩沖處，用眼科剪將組織塊盡可能的剪碎，然后加入0.5-1ml 的新配置的裂解液，研磨直至沒有明顯的組織塊，這個過程注意冰上操作;

　　(3)將組織勻漿液移入1.5ml的EP管中，4 ℃ 12000g 離心30min;

　　(4)吸取上清至新的管中;

　　(5)進行蛋白定量或者變性進行蛋白實驗。

　　2、細胞總蛋白的提取

　　(1)裂解液的用量:107個細胞需要裂解液1ml;

　　(2)貼壁細胞:棄去培養基，用冷的PBS 洗兩次，棄去PBS，然后加入計算好的細胞裂解液;在冰上用細胞刮刀進行刮離細胞，將刮離的細胞裂解液移入EP管中，顛倒裂解20-30min;

　　(3)懸浮細胞:4℃ 400g 離心收集細胞，用冷的PBS洗兩次細胞，同樣按細胞數加入裂解液，渦旋10s，放置冰上裂解10min，重復3-4次;

　　(4)裂解完畢之后，將細胞裂解液4℃12000g離心30min;

　　(5)將上清移入新的EP管中;進行蛋白定量或者變性進行蛋白實驗。

　　(提取好的蛋白建議保存于-80℃，即用即取，避免反復凍融，避免長時間儲存。)

相關產品

凡本網注明“來源：化工儀器網”的所有作品，均為浙江興旺寶明通網絡有限公司-化工儀器網合法擁有版權或有權使用的作品，未經本網授權不得轉載、摘編或利用其它方式使用上述作品。已經本網授權使用作品的，應在授權范圍內使用，并注明“來源：化工儀器網”。違反上述聲明者，本網將追究其相關法律責任。
本網轉載并注明自其他來源（非化工儀器網）的作品，目的在于傳遞更多信息，并不代表本網贊同其觀點和對其真實性負責，不承擔此類作品侵權行為的直接責任及連帶責任。其他媒體、網站或個人從本網轉載時，必須保留本網注明的作品第一來源，并自負版權等法律責任。
如涉及作品內容、版權等問題，請在作品發表之日起一周內與本網聯系，否則視為放棄相關權利。

聯系我們