什么叫鬼峰？在做液相色譜反相系統(tǒng)梯度洗脫時(shí)，有時(shí)會(huì)遇到儀器不進(jìn)樣也有出峰的情況，這種峰影響定量結(jié)果，也可使分析工作無法進(jìn)行，由于它神出鬼沒的特質(zhì)，所以被稱為鬼峰。那我們就來了解下，鬼峰出現(xiàn)的可能原因及排除方法。

在懷疑峰型異常是不是鬼峰時(shí)，我們首先可以通過仔細(xì)核查操作條件是否與分析方法一致，儀器工作狀態(tài)是否正常來看有無操作失誤，確定不是上述失誤后，儀器不進(jìn)樣，或者進(jìn)流動(dòng)相，或者只運(yùn)行方法看基線中是否還存在莫名的色譜峰來判斷是否為鬼峰。從鬼峰出現(xiàn)的頻率來看，一般來說，可以從兩個(gè)大方面進(jìn)行考慮：流動(dòng)相和液相系統(tǒng)。

鬼峰產(chǎn)生的原因是多種多樣的，根據(jù)本人的經(jīng)驗(yàn)以及文獻(xiàn)報(bào)道，將原因歸納為以下幾個(gè)方面：

1、流動(dòng)相、樣品稀釋液、儀器或是容器中存在雜質(zhì)，當(dāng)梯度開始時(shí)由于有機(jī)相比例不高，洗脫能力不強(qiáng)，雜質(zhì)在色譜柱柱頭富集，隨著流動(dòng)相比例變化，洗脫能力增強(qiáng)，富集的雜質(zhì)被洗脫，從而形成鬼峰。

2、流動(dòng)相脫氣不理想。空氣在有機(jī)相和水中的溶解度不同，當(dāng)水和有機(jī)相混合時(shí)，氣泡就產(chǎn)生了。

3、操作問題。

試劑問題

1、有機(jī)溶劑

甲醇制備工藝相對(duì)乙腈來說較為簡(jiǎn)單，雜質(zhì)含量也較少。但是由于甲醇紫外吸收范圍比乙腈廣，所以當(dāng)使用紫外檢測(cè)器時(shí)，尤其是波長(zhǎng)較低時(shí)，盡量使用乙腈作為有機(jī)相，用甲醇的話漂移太大。而用作梯度色譜的乙腈質(zhì)量要求較高，一般用進(jìn)口梯度色譜專用乙腈能夠很好的減少鬼峰的出現(xiàn)。

2、水

很多單位用自制蒸餾水作為水相，但是結(jié)果并不是很好。原因就是一些低沸點(diǎn)的有機(jī)雜質(zhì)并不能夠通過蒸餾除掉。有條件的盡量用HPLC級(jí)的純水，沒有條件的也可用娃哈哈或是屈臣氏等水代替，但是如果色譜條件比較嚴(yán)格也是有可能出問題的。

3、其它試劑

緩沖鹽、TFA、EDTA等試劑也會(huì)對(duì)流動(dòng)相造成很大的影響，盡量用純度高的試劑配制流動(dòng)相。

4、流動(dòng)相配置好后預(yù)先超聲脫氣。

5、盛放流動(dòng)相的容器或是量具受到污染。

這種污染可能來自于洗滌劑、鉻酸洗液或是其他實(shí)驗(yàn)人員用完后的殘留雜質(zhì)。流動(dòng)相容器的清洗一般用干凈的水+有機(jī)溶劑涮洗就行，過多的清洗步驟反而可能造成二次污染。有時(shí)流動(dòng)相容器的塑料蓋碎片都有可能是雜質(zhì)的來源。

6、pH計(jì)

很多pH計(jì)以聚碳酸酯作為外殼，然而聚碳酸酯是可以溶于有機(jī)溶劑的，所以盡量使用玻璃pH計(jì)來測(cè)量流動(dòng)相的pH。

7、濾膜

劣質(zhì)的或者型號(hào)錯(cuò)誤的濾膜往往是鬼峰出現(xiàn)的原因。

8、放置時(shí)間過長(zhǎng)。

流動(dòng)相在空氣中暴露時(shí)間過長(zhǎng)，就可能吸收空氣中的有機(jī)雜質(zhì)，有時(shí)流動(dòng)相中的添加劑，例如TFA，時(shí)間長(zhǎng)了會(huì)氧化從而產(chǎn)生雜質(zhì)。

儀器問題

1、液相的流動(dòng)相管路被污染。

長(zhǎng)時(shí)間的使用含水量較高的流動(dòng)相(尤其是加入緩沖鹽的)，細(xì)菌就容易在管路中滋生，細(xì)菌的代謝產(chǎn)物或是細(xì)胞碎片能造成鬼峰。

2、輸送泵故障，造成系統(tǒng)壓力不穩(wěn)，從而產(chǎn)生鬼峰。

3、單向閥堵塞。

造成系統(tǒng)壓力不穩(wěn)，從而產(chǎn)生鬼峰。早期島津的液相單向閥貌似不能用純乙腈作為流動(dòng)相，現(xiàn)在應(yīng)該已經(jīng)得到改進(jìn)。

4、在線脫氣機(jī)脫氣不理想。

5、兩種流動(dòng)相的有機(jī)相比例相差太大。

例如A為100%水，B為100%乙腈。在梯度條件允許的情況下盡量減少兩中流動(dòng)相之間的差距，降低空氣在兩中流動(dòng)相中溶解度的差異，從而減少氣泡的產(chǎn)生。

6、溶劑瓶和溶劑過濾頭的污染。

長(zhǎng)時(shí)間的使用純水相或含水量較高的流動(dòng)相（尤其是加入緩沖鹽的），細(xì)菌容易滋生，細(xì)菌的代謝產(chǎn)物或是細(xì)胞碎片停留導(dǎo)致污染。如果流動(dòng)相在使用完后長(zhǎng)期未更換新的流動(dòng)相瓶或者流動(dòng)相瓶未做清洗，而是采用直接添加補(bǔ)充的方式也可能會(huì)導(dǎo)致鬼峰的產(chǎn)生。

此種情況建議制定好流動(dòng)相瓶清洗和更換計(jì)劃，進(jìn)行更換或清洗。

此外，溶劑過濾頭也可存在污染。去除溶劑瓶?jī)?nèi)的過濾頭看鬼峰能否變小或消失，如果變小或消失則可以更換溶劑瓶?jī)?nèi)的過濾頭。

7、來自樣品殘留。

樣品可在儀器各個(gè)板塊殘留。我們可逐一進(jìn)行排查。

a.確認(rèn)問題來自進(jìn)樣器樣品殘留。

將進(jìn)樣器的入口和出口管線用兩通直接連接，如果鬼峰問題解決則懷疑進(jìn)樣針，針座、六通閥轉(zhuǎn)子污染問題，然后進(jìn)行相關(guān)的清洗和更換。

Tips：在懷疑進(jìn)樣器殘留問題前要先檢查連接管線是否正常，不然也會(huì)導(dǎo)致鬼峰。

b.確認(rèn)問題來自色譜柱的樣品殘留。

色譜柱可對(duì)流動(dòng)相或系統(tǒng)流路內(nèi)的強(qiáng)保留污染組分起到富集作用，在有機(jī)相比例隨梯度程序變化的過程中而被沖洗出來。

將色譜柱更換成兩通，如果鬼峰消除則是色譜柱被污染。可通過清洗色譜柱或者直接更換新的色譜柱解決。