產品介紹

由研發團隊精心研制的人臍帶間充質干細胞成骨誘導分化試劑盒，包含適合人臍帶間充質干細胞生長的基礎培養基、優級胎牛血清及誘導細胞分化所需的添加物。

本產品適用于人臍帶間充質干細胞的成骨誘導分化。大量細胞培養數據驗證，本產品可穩定、高效誘導上述細胞分化為成骨細胞。

注意：本產品僅提供給進一步科研使用，不可用于臨床治療等其他用途。

成骨分化套裝

質量控制

通過細菌、真菌、支原體、內毒素檢測。

通過滲透壓、pH檢測。

通過產品性能檢測

處理原則

1.嚴格的無菌環境。務必保證實驗室整體和操作區域的清潔。

2.規范的操作方式。請按照產品說明書描述的方式操作，嚴格控制變量，做好對照實驗。

3.各成分需按照保存條件妥善存放，并盡快使用。

4.若短期內無法用完整套培養基，應按套裝內各成分體積比例分批配制并分裝保存。

產品穩定性及保存條件

1.套裝內所有成分均需避光保存。

2.套裝內基礎培養基需置于4℃冰箱保存，保質期為1年；其他成分需置于-20℃保存，保質期為2年。

3.配制后的專用培養基，需放置4℃保存，保質期為1個月；若能保證培養條件穩定，容器密封性能良好，避免冷熱交替，則保質期可適當延長，但不得超過45天。

4.所有產品請于保質期內使用；過期的成分可能嚴重影響培養效果

專用培養基的配制

所需材料

1.人臍帶間充質干細胞成骨誘導分化試劑盒

2.清潔、無菌、質量穩定的一次性耗材（移液管、移液器吸頭、離心管等）

3.潔凈的封口膜

4.鋁箔紙等避光材料

操作步驟

1.配制前至少6h，將套裝中的優級胎牛血清（以下簡稱血清）放置于4℃冰箱內融化。

注意：融化后的血清中可能出現絮狀物，其主要成分為析出的血纖蛋白，這不會影響產品使用效果。若不是對細胞培養體系的純凈度要求J高，我們不建議過濾或離心去除絮狀物。

2.配制前至少30min，將套裝中人臍帶間充質干細胞成骨誘導分化添加物（以下簡稱添加物）放置于4℃冰箱內，直至融化。

3.上下顛倒或輕彈試劑管以混勻試劑。

4.用75%醫用酒精仔細擦拭所有成分外包裝。在超凈臺內打開包裝。

5.將血清、添加物全部加入細胞基礎培養基（以下簡稱基礎培養基）中。

6.取少量基礎培養基，洗滌各瓶、管，盡可能將所有成分全部加入基礎培養基中。

7.擰緊基礎培養基瓶蓋，輕柔并充分搖勻。

8.用封口膜密封瓶口，用鋁箔紙包裹瓶身，并標注名稱、配制日期等信息。

特別提醒

1.若短期內無法用專用部培養基，我們建議分批配制；請按照套裝內各成分比例，配制所需量；但剩余的成分必須嚴格按照各自的保存條件妥善保存，并且不可多次凍融。

2.人臍帶間充質干細胞成骨誘導分化試劑盒內的所有成分都嚴格控制無菌，一般情況下我們不建議再次除菌。若配制過程有污染風險，可將專用培養基過濾除菌。

3.配制完成的成骨誘導分化培養基，請分裝為小份，避免整瓶培養基反復溫浴和冷藏交替

誘導分化操作流程

所需材料

1.人臍帶間充質干細胞成骨誘導分化試劑盒

2.0.1%明膠溶液

3.Phosphate-BufferedSaline(1×PBS)

操作步驟

注意：1）本操作規程以六孔板為例，請根據實際情況選用合適的培養容器；

2）為減少誘導過程細胞漂起、不貼壁，建議使用明膠包被培養容器；

3）誘導培養基在使用前均需預熱至37℃。

1.加1mL0.1%明膠到六孔板中，搖勻，使其能均勻覆蓋各孔底面。

2.將鋪有0.1%明膠的六孔板放置在超凈臺或CO₂培養箱至少30min。

3.30min后吸去明膠即可用于接種細胞，或等待六孔板晾干再接種。

4.將待誘導的人臍帶間充質干細胞按照2×10⁴cells/cm²的細胞密度接種于六孔板中，每孔加入2mL普通專用培養基。

5.細胞置于37℃、5%CO2、飽和濕度的CO2培養箱中培養。

6.當細胞融合度達到70%時，小心地將孔內專用培養基吸走，向六孔板中加入2mL人臍帶間充質干細胞成骨誘導分化培養基。

7.每隔3天換用新鮮的人臍帶間充質干細胞成骨誘導分化培養基。

8.誘導2~4周后，視細胞的形態變化及生長情況，用茜素紅進行染色。

注意：為防止成骨細胞脫落、鈣結節損失，建議成骨過程中出現明顯鈣結節之后，每三天半量換液一次

茜素紅染色分析

所需材料

1.Phosphate-BufferedSaline(1×PBS)

2.4%多聚甲醛溶液或10%福爾馬林溶液

3.茜素紅染色液

操作步驟

注意：1）為防止鈣結節脫落，所有操作盡可能輕緩；

2）茜素紅使用前請恢復至室溫；如果染色效果較差，可適當延長染色時間；

3）請確認出現鈣結節后再進行染色。

1.成骨誘導分化結束后，吸去六孔板中的成骨誘導分化專用培養基，用1×PBS輕柔洗滌2~3次。

2.每孔加入2mL4%多聚甲醛溶液（或10%福爾馬林），室溫固定30min。

3.吸去固定液，用1×PBS輕柔洗滌2~3次，確保將固定液清洗干凈。

4.每孔加入2mL茜素紅工作液，室溫染色5~10min。

5.吸去茜素紅染色液，用1×PBS輕柔洗滌2~3次，充分洗去多余染色液。

6.每孔加入2mL1×PBS，將培養板置于顯微鏡下觀察成骨染色效果。

7.染色后的六孔板用封口膜封裝后，置于4℃可保存2周

染色效果圖