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培養HL-60-LUC人急性早幼粒白血病細胞時需要注意些什么?

來源:廈門逸漠生物科技有限公司   2023年02月23日 14:59  
  HL-60-LUC人急性早幼粒白血病細胞引進ATCC細胞庫,確保細胞準確,提供STR鑒定報告,出庫附COA質檢報告,確保無支原體、細菌、酵母和真菌等。
 
  HL-60-LUC人急性早幼粒白血病細胞的操作:
 
  1)復蘇細胞:將含有1 mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加4 mL培養基混合均勻。在1000 rpm條件下離心3 min,棄去上清液,加1-2 mL培養基后輕輕吹勻。然后將所有細胞懸液加入含適量培養基的培養瓶中培養過夜(或將細胞懸液加入6 cm皿中,加入約4 mL培養基,培養過夜)。下一天換液并檢查細胞密度。
 
  2)細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養。
 
  方法一:收集細胞,1000RPM條件下離心3-5min分鐘,棄去上清液,補加1-2ml培養液后吹勻,將細胞懸液按1:2到1:4的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或者瓶中。
 
  方法二:可選擇半數換液方式,棄去半數培養基后,將剩余細胞懸起,將細胞懸液按1:2到1:3的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或者瓶中。
 
  3)細胞凍存:待細胞生長狀態良好時,可進行細胞凍存。下面T25瓶為例;
 
  a、收集細胞及細胞培養液,裝入無菌離心管中,1000 rpm條件下離心4 min,棄去上清液,用PBS清洗一遍,棄盡PBS,然后進行細胞計數。
 
  b、根據細胞數量對應加入無血清細胞凍存液,使細胞密度5×106~1×107/mL,輕輕混勻,每支凍存管凍存1mL細胞懸液,注意凍存管做好標識。
 
  c、將凍存管放入-80℃冰箱,24 h后轉入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。
 
  HL-60-LUC人急性早幼粒白血病細胞的培養注意事項:
 
  1.收到細胞后首先觀察細胞瓶是否完好,培養液是否有漏液、渾濁等現象,若有上述現象發生請及時和我們聯系。
 
  2.仔細閱讀細胞說明書,了解細胞相關信息,如細胞形態、所用培養基、血清比例、所需細胞因子等,確保細胞培養條件一致,若由于培養條件不一致而導致細胞出現問題,責任由客戶自行承擔。
 
  3.用75%酒精擦拭細胞瓶表面,顯微鏡下觀察細胞狀態。因運輸問題,部分細胞由于溫度變化及劇烈碰亡破碎形成碎片,是正常現象。觀察好細胞狀態后,75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養箱放置4-6h。
 
  4.貼壁細胞可以消化,懸浮細胞直接混勻收集細胞,900 rpm-1000 rpm離心3 min,棄上清。加5 mL PBS重懸細胞,再900 rpm-1000 rpm離心3 min,,用新鮮的*培養基重懸細胞,并接種到新的培養瓶或培養皿中,置于培養箱中進行培養。
 
  5.請客戶用相同條件的培養基用于細胞培養。

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