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ELISA實驗之樣本前期的處理方法

來源:杭州千匯生物科技有限公司   2023年04月18日 19:58  

實驗檢測的樣本是有多種類型的,如血清、血漿、尿液、細胞培養(yǎng)上清或組織勻漿液等,不同類型的檢測樣本前期的處理方法是不一樣的。

一、均質(zhì)

1、組織樣本:肉、肝食品類切細,用絞肉機反復(fù)絞碎,混合均勻。

2、水產(chǎn)樣本:去除樣品的非食用部分,食用部分切細,用均質(zhì)器均漿。原料表面較臟時,需適當用蒸餾水清洗。

3、蛋類:鮮蛋去殼,蛋黃和蛋白充分混勻。

4、水果、蔬菜類:先用水洗去泥沙,然后除去表面的水分,取食用部分。

二、振蕩提取

將提取溶劑加入到裝有樣品的具塞容器中,振蕩,使提取溶劑與容器內(nèi)的樣品充分接觸以深入到樣本組織內(nèi)部,提取待測組分。振蕩方式主要就是用振蕩器進行上下、往返式振蕩、手搖式上下振蕩。在組織樣本中加入有機溶劑之間提取時,應(yīng)邊加邊振蕩,防止組織凝結(jié)成團,不利于提取。

三、濃縮

由于凈化過程中引入的溶劑,可能會降低待測組分的濃度或者不適宜直接分析,需要去除全部有機溶劑。即試劑盒前處理步驟中把樣本在60℃氮氣下吹干,再用復(fù)溶液溶解干燥殘留物。濃縮方式包括用氮氣吹干除雜、壓縮空氣吹干除雜等。

請注意:

1、在吹干樣本之前,用甲醇清洗針頭,防止雜質(zhì)干擾。

2、在吹樣本時,針頭應(yīng)在液面上空,避免與樣本接觸,防止產(chǎn)生交叉污染。

3、樣本吹干后應(yīng)立即取下,避免吹的時間過長,影響最終檢測結(jié)果。

4、不同的藥物,吹干后樣本的保質(zhì)期不同,提倡待樣本回到室溫后立即復(fù)溶。

四、乳化現(xiàn)象

在用有機溶劑提取過程中,如果出現(xiàn)乳化現(xiàn)象,解決的方法有:

1、用細頭輕輕的攪拌,破壞乳化后,再重復(fù)離心。

2、再加入適量的提取劑,重新振蕩。注意離心后要保證樣本的稀釋倍數(shù)不變。

五、凈化

經(jīng)過提取的待測組分中通常含有一些會干擾試劑盒中抗原抗體反應(yīng)的雜質(zhì)或者是含有與待測物結(jié)構(gòu)相似的雜質(zhì)。將待測組分與雜質(zhì)分離的過程,我們稱為試劑盒中樣本的凈化。在我們現(xiàn)有的試劑盒前處理方法中涉及到的最常見的凈化是液液分配法。比如,用復(fù)溶液溶解干燥殘留物之前先加入適量的正己烷,在加入正己烷和復(fù)溶液渦動后如果出現(xiàn)乳化現(xiàn)象,可以用60℃水浴加熱,至乳化現(xiàn)象消失或減弱后,加大離心轉(zhuǎn)速進行離心。


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