TC、TG實(shí)驗(yàn)方法

來(lái)源：上海茁彩生物科技有限公司 2024年08月20日 09:03

一、組織樣本

1、同樣還是用等滲緩沖液，按重量體積1：9，制備勻漿，2500rpm*10min，取上清即10%勻漿用于TG、TC的測(cè)定（提取的不充分，但也能測(cè)定）

2、用有機(jī)溶劑提取，a:用無(wú)水乙醇作勻漿介質(zhì)，按上面方法制備勻漿待測(cè)，提取效果比等滲緩沖液好

b:用特殊有機(jī)溶劑提取（如氯仿甲醇混合液等）提取效果好，但由于高揮發(fā)，測(cè)定不準(zhǔn)確，所以一般需用N2吹干后用無(wú)水乙醇復(fù)溶后進(jìn)行測(cè)定。

二、培養(yǎng)細(xì)胞

1、用PBS洗細(xì)胞

2、加入500ul乙醇，使之鋪滿培養(yǎng)皿，培養(yǎng)皿內(nèi)的細(xì)胞泛白時(shí)把培養(yǎng)皿斜放，用細(xì)胞刮板將細(xì)胞刮下來(lái)，使細(xì)胞浸泡在乙醇中

3、用移液器把細(xì)胞和乙醇移到玻璃勻漿器中，碾磨3分鐘成懸液

4、收集懸液，4000 rpm*10min離心，取上清50ul測(cè)定

三、奶樣

新鮮或者凍存的奶樣本，用無(wú)水乙醇按照不同比例進(jìn)行提取（奶樣：無(wú)水乙醇=1：1、1：4、1：9、1：19、1：49、1：99）充分漩渦混勻2分鐘，4000轉(zhuǎn)/分離心10分鐘，取上清按操作表操作。

按稀釋度、結(jié)果做濃度曲線，取直線線性段的濃度為宜。

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