改良Y培養(yǎng)基的檢驗原理與使用方法及應(yīng)用研究!
一、背景
改良Y培養(yǎng)基用于分離小腸結(jié)腸炎耶爾森氏菌,成分(g/L)蛋白胨15.0;氯化鈉5.0;乳糖10.0;草酸鈉2.0;去氧膽酸鈉6.0;三號膽鹽5.0;丙酮酸鈉2.0;孟加拉紅0.04;水解酪蛋白5.0;瓊脂 17.0;pH值7.4±0.1,25℃。
檢驗原理:蛋白胨、水解酪蛋白在培養(yǎng)基中作為營養(yǎng)物質(zhì)提供菌體細胞生長所需要的氮源、碳源及生長因子等;氯化鈉維持培養(yǎng)基體系滲透壓;乳糖作為可發(fā)酵的碳水化合物;三號膽鹽和去氧膽酸鈉抑制革蘭氏陽性菌生長;丙酮酸鈉和草酸鈉能促進目標(biāo)菌生長;孟加拉紅作為著色劑;瓊脂作為凝固劑。
用法:稱取本品67.0g,加熱溶解于1000ml蒸餾水中,分裝,121℃高壓滅菌15分鐘,待冷至45-50℃時,傾入無菌平皿。
直桿菌到球桿菌,直徑0.5~0.8μm,長1~3μm。無芽孢。不形成莢膜,但在37℃生長或來自體內(nèi)樣品的細胞中的鼠疫耶爾森氏菌(Y.pestis)能產(chǎn)生包被。革蘭氏陰性。37℃時不運動。生長在30℃以下時以周生鞭毛運動。
鼠疫耶爾森氏菌總是不運動。在普通的營養(yǎng)培養(yǎng)基上生長。在營養(yǎng)瓊脂上培養(yǎng)24h后,菌落半透明到不透明,直徑0.1~1.0mm。生長溫度28~29℃。兼性厭氧,既具有呼吸型代謝又具有發(fā)酵型代謝。氧化酶陰性,接觸酶陽性。除了個別的生物變型(biovars)外,都能還原硝酸鹽成亞硝酸鹽。
發(fā)酵葡萄糖和其他碳水化合物產(chǎn)酸,但不產(chǎn)氣或產(chǎn)少量的氣。表現(xiàn)特征常常與溫度有關(guān),一般培養(yǎng)在25~29℃比在37~39℃能呈現(xiàn)出更多的特征性。所研究過的種具有腸桿菌的常見抗原。生境很廣泛(從有生命到無生命),有些種適應(yīng)于特異性寄主。
二、應(yīng)用
用于生豬屠宰過程中小腸結(jié)腸炎耶爾森氏菌的調(diào)查及預(yù)測模型的研究:
從研究該菌的增菌分離方法入手,調(diào)查生豬屠宰過程中耶氏菌的流行分布情況,并應(yīng)用數(shù)學(xué)模型預(yù)測該菌在冷卻豬肉中的生長動態(tài),為冷卻豬肉生產(chǎn)過程中更好地控制該菌提供有效的理論依據(jù)和技術(shù)手段。
1、生豬屠宰過程中小腸結(jié)腸炎耶爾森氏菌分離方法的研究對屠宰場屠宰過程中豬的咽喉部位216份樣品感染耶氏菌進行了分離鑒定,分別用改良磷酸鹽緩沖液(PBs)和氯化鎂孔雀綠肉湯(MM)兩種增菌方法,比較CIN-I、改良“Y”和MacConkey瓊脂培養(yǎng)基分離耶氏菌的效果。試驗結(jié)果表明,PBS 26℃快速增菌30±2h后,使用CIN-Ⅰ分離瓊脂培養(yǎng)基可快速分離耶氏菌,提高該菌的檢出率,適合屠宰過程中耶氏菌的分離。
2、生豬屠宰過程中小腸結(jié)腸炎耶爾森氏菌的調(diào)查研究對不同屠宰生產(chǎn)工藝中豬咽喉部位及胴體表面感染的耶氏菌進行調(diào)查研究,確定血清型分布情況及生物型別。結(jié)果表明,本次試驗共檢出22株耶氏菌,為血清型O∶3,O∶8,O∶9和生物2、3型,均屬致病型菌株。該菌主要寄生在健康豬的咽喉部位,在不同屠宰工藝生產(chǎn)過程中對豬胴體表面均有污染,其中燙毛工藝污染較為嚴(yán)重。
3、冷卻豬肉中小腸結(jié)腸炎耶爾森氏菌生長動力學(xué)模型的預(yù)測將特定的耶氏菌接種到無污染的冷卻豬肉表面,托盤包裝后分別在0、5、10和15℃溫度條件下貯藏,建立和驗證了用于預(yù)測冷卻豬肉中耶氏菌生長的動力學(xué)模型。將不同溫度下得到的耶氏菌生長實驗值用于建立生長動力學(xué)模型,表明修正Gompertz方程能很好的描述耶氏菌在冷卻豬肉中的生長動態(tài)。
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