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DS 系列– TN 168 OD600 測量性能數(shù)據(jù)示例

來源：上海牧榮生物科技有限公司 2025年06月30日 16:54

對于 OD600測量時，穿過樣品的光被懸浮在樣品中的細胞向隨機方向散射。這種光散射是特定細胞大小和形狀以及細胞懸液密度的函數(shù)。此外，死細胞和細胞碎片可能會導致光散射。相同密度的不同細胞類型（例如每毫升細胞數(shù)）可能導致不同的 OD600值。

光學配置

分光光度計的光學配置在特定儀器檢測到的光散射中起著重要作用。不同的 OD600當在具有不同光學設置的分光光度計上測量時，將報告相同細菌培養(yǎng)物的值。一個 OD600的 0.8 可以在另一臺儀器上報告為 0.5，而不會在任何一臺設備上出現(xiàn)錯誤。

換算系數(shù)

DeNovix DS-11 系列分光光度計/熒光計可使用 1 μL 微量模式（適合高密度培養(yǎng)物）或各種光程比色皿模式測量微生物培養(yǎng)物。

經(jīng)驗目標值

許多研究人員依賴靶標 OD600在收獲微生物細胞培養(yǎng)物或確定接種用于蛋白質(zhì)表達研究的培養(yǎng)物的正確密度時從文獻來源獲得的值。遺憾的是，這些目標值可能不適合細胞類型和所用儀器的組合。建議將 OD600使用與 OD 相關的生長曲線根據(jù)經(jīng)驗確定值600使用新分光光度計時每種細胞類型的板計數(shù)值。

DS-11 微量模式可實現(xiàn)更高的 OD600值使用其獲得特別的自動路徑長度調(diào)整。請記住，微量和比色皿模式使用不同的光學配置，因此在比較使用兩種模式測量的值時，建立轉(zhuǎn)換因子可能很有用。

最好使用接近所需目標 OD 的測量值來確定因子600價值。酌情考慮稀釋。

可以確定一個等效因子，然后將其應用于使用不同分光光度計進行的測量。

示例數(shù)據(jù)

下面的數(shù)據(jù)是一個例子，說明了在不同分光光度計上測量相同的光散射樣品如何導致不同的 OD600 測量值（表 1 和表 2）。

將 Formazin 4000NTU 濁度標準品（Hach cat #246149）稀釋 7.7 倍以產(chǎn)生初始儲備液。然后在水中進行一系列 2 倍連續(xù)稀釋。使用一次性比色皿和 2 mL 的相應稀釋度測量每種溶液，一式三份。未對 600 nm 測量值進行基線校正。

Table 1: Mean OD600 Values; n=3

Sample	Agilent 8453	DS-11+
Stock	1.1588	0.8376
Stock 1:2	0.5696	0.4245
Stock 1:4	0.2794	0.2173
Stock 1:8	0.1372	0.1125
Stock 1:16	0.0684	0.0594
Stock 1:32	0.0326	0.0310
Stock 1:64	0.0140	0.0158

Table 2: Precision of Replicate Measurements; n=3

Sample	Agilent 8453 % CV	DS-11+ % CV
Stock	0.61%	0.24%
Stock 1:2	0.82%	1.15%
Stock 1:4	1.61%	2.76%
Stock 1:8	0.63%	1.92%
Stock 1:16	0.91%	3.82%
Stock 1:32	5.03%	8.58%
Stock 1:64	11.17%	10.82%

線性范圍

基于比色皿的儀器通常具有測得光程的外徑上限約為 1.5。外徑600如此高的值可能不足以覆蓋培養(yǎng)物的整個生長周期，并且在生長方面可能不是線性的。死亡期的培養(yǎng)物可能表現(xiàn)出不同的光散射行為，這可能會影響活細胞密度與測得的 OD 之間的相關性600值。

因此，必須仔細稀釋培養(yǎng)物，以便繪制整個生長曲線或確定測量值不再與活細胞密度線性相關的極限。

此外，盡管測得的 OD600值和特定像元密度在兩種不同儀器上的范圍可能重疊，線性線的斜率可能不同。表 1 中的數(shù)據(jù)如下圖所示（圖 1）作為此范式的一個例子。

當使用轉(zhuǎn)換因子將數(shù)據(jù)從一臺儀器關聯(lián)到另一臺儀器時，可能需要對特定的 OD 范圍使用不同的因子來補償不同的斜率。

注意：盡管斜率不同，但兩種儀器的 R2 值均> 0.9999。

linearity — 圖 1：福爾馬肼標準品與測得的 OD600 值之間的線性關系。

OD 600 值和細胞數(shù)

The OD600應用程序允許用戶輸入一個細胞數(shù)因子，該因子將乘以測得的 OD600值來計算近似的細胞/mL 濃度。如前所述，OD600值取決于被采樣溶液中細胞的大小和形狀以及細胞密度。一個 OD600值 1 可能等于大約 1 x108一種細胞類型的細胞，但僅等于 0.5 x108細胞。

要使用此功能，建議最初為每種細胞類型確定適當?shù)募毎麛?shù)轉(zhuǎn)換因子。構建 OD 的校準曲線600值與瓊脂平板上生長的菌落形成單位的細胞數(shù)量相關。確保在適當時乘以稀釋因子。

酵母細胞通常比細菌細胞大。因此，OD600值 1 通常相當于酵母細胞比細菌細胞少。

最佳實踐

為確保最佳結(jié)果，以 OD 為目標600對于微量和比色皿模式，應根據(jù)經(jīng)驗確定每種細胞類型的值。

比色皿模式（推薦）

確保培養(yǎng)物充分混合，并且在從懸浮液中取出等分試樣之前，細胞尚未沉淀。
確保預期的細胞密度在所選 DS-11 + 比色皿模式的線性范圍內(nèi)。
使用高質(zhì)量的塑料比色皿或 Z 高度為 8.5 mm 的石英比色皿。
每次樣品測量使用干凈的比色皿。根據(jù)制造商推薦的方案清潔比色皿。
確保比色皿以正確的方向插入。

微量模式

在進行空白測量之前清潔兩個樣品測量表面。
確保培養(yǎng)物充分混合，并且在從懸浮液中取出等分試樣之前細胞尚未沉淀。
確保預期細胞密度在所選 DS-11 / DS-11 + 微量模式的線性范圍內(nèi)。請記住，盡管微量模式可以測量具有非常高 OD 值的樣品，但培養(yǎng)物本身可能不會表現(xiàn)出對高細胞密度的線性響應。
確保每次測量時將完整的 1 μL 樣品輸送到樣品表面。
每次測量使用新鮮的等分試樣。
使用新鮮的吸頭將每個樣品等分試樣提供。
將樣品移液到測量表面時避免引入氣泡。
每次測量后，立即使用干燥的實驗室抹布從頂部和底部表面去除樣品。

不同波長的 OD

Formula Methods 應用程序支持創(chuàng)建自定義方法和公式，包括用于測量 600 nm 以外波長下 OD 的方法和公式。例如，可以使用以下參數(shù)測量 650 nm 處的 OD：分析 nm = 650，基線 nm = 留空，最小 nm = 550，最大 nm = 700。

DeNovix DS-11 系列儀器能夠使用預配置的 OD 測量酵母和微生物培養(yǎng)物600應用程序。

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