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關于細胞傳代方法

來源:上海聯碩生物科技有限公司   2025年07月02日 08:49  

一:細胞與試劑方面

1、細胞(單層細胞,鏡檢合適)

2、培養液(MEM-0.2%LH 培養液或MEM 培養液或199 等合適細胞有要求的培養液)

3、滅活小牛血清、慶大霉素溶液(1 萬單位)

4、7.5%NaHC03 溶液


5、0.25%胰蛋白酶

6、 PBS 洗液。

二:試驗小用具方面

1、小方瓶(100m1)

2、克氏瓶

3、膠塞

4、吸管(10ml、1m1)

5、細胞吹打管(20 ml)(以上用具需經121℃至少15 分鐘高壓滅菌)

6、C02 孵箱

7、超凈臺

8、倒置顯微鏡

9、4℃、- 20℃冰箱

 

三:細胞傳代的操作過程

1、挑選細胞:鏡檢細胞,挑選成長狀態杰出,細胞界限清晰,具有立體感,形狀好無污染、無反常及可疑病變細胞。

2、制造細胞培養液:按以下配比制造MEM-0.2%LH 培養液100ml 內,參加滅活小牛血清10m1,慶大霉素溶液0.3m1,7.5%碳酸氫鈉溶液3ml。(僅供一般參考)。

3、消化細胞:先用PBS 洗液沖刷細胞外表1-2 次,每次10m1,棄去洗液,向細胞瓶內參加0.25%胰蛋白酶溶液,每瓶1m1,細胞瓶平放,使消化液覆蓋細胞外表。

4、至細胞脫落到胰酶中:每瓶參加10m1 細胞培養液吹打渙散細胞,按所需的傳代比例分裝于小方瓶(100m1)中,再參加10m1 細胞培養液重復吹打一次后分裝,然后補加至所需培養量。

5、加塞,置于37±1℃孵箱培養。約2~4 天成片(由細胞接種濃度決定)。

6、填寫傳代記錄。

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