賽默飛梯度 PCR 儀的操作步驟如下:
一、準(zhǔn)備工作
1、儀器準(zhǔn)備:確保梯度 PCR 儀已正確連接電源并打開,檢查并確認(rèn)儀器已校準(zhǔn)(如有必要)。
2、樣本準(zhǔn)備:準(zhǔn)備好 PCR 反應(yīng)混合物,包括模板 DNA/RNA、引物、dNTPs、緩沖液和 Taq DNA 聚合酶。根據(jù)實(shí)驗(yàn)要求配置各反應(yīng)組分的濃度和體積。
二、設(shè)置 PCR 反應(yīng)
1、裝載樣品:使用 PCR 管或 PCR 板裝載反應(yīng)混合物,確保每個(gè)反應(yīng)孔中裝載的體積一致,并且避免氣泡。
2、放置樣品:將裝載好的 PCR 管或 PCR 板放入 PCR 儀的樣品槽中,確保放置穩(wěn)固。
三、設(shè)置程序
1、選擇程序模式:啟動(dòng)儀器,進(jìn)入主菜單,選擇 “新建程序” 或從預(yù)設(shè)程序中選擇合適的程序。
2、設(shè)定溫度和時(shí)間:設(shè)置每個(gè)步驟的溫度和時(shí)間,包括變性、退火和延伸步驟。設(shè)置梯度范圍(如需要進(jìn)行梯度 PCR),以確定最佳退火溫度,設(shè)定循環(huán)次數(shù)。
3、保存程序:將設(shè)定好的程序保存為特定名稱,以便下次使用。
四、運(yùn)行 PCR
1、啟動(dòng)程序:確認(rèn)樣品和程序設(shè)置無誤后,按 “開始” 按鈕啟動(dòng) PCR 程序。
2、監(jiān)控運(yùn)行:在 PCR 運(yùn)行過程中,通過顯示屏監(jiān)控反應(yīng)進(jìn)度和溫度曲線,確保儀器運(yùn)行正常,無異常報(bào)警。
五、結(jié)束和取出樣品
1、程序完成:程序完成后,儀器會(huì)自動(dòng)停止并發(fā)出提示音。
取出 PCR 管或 PCR 板:小心避免污染。
2、樣品處理:進(jìn)行后續(xù)分析,如瓊脂糖凝膠電泳或測序。
六、儀器清潔和維護(hù)
1、清潔儀器:定期用適當(dāng)?shù)那鍧崉┖蜔o絨布擦拭儀器外部和樣品槽,確保樣品槽內(nèi)無殘留液體或雜物。
2、維護(hù)保養(yǎng):定期檢查和校準(zhǔn)溫度傳感器,確保其準(zhǔn)確性,定期更新儀器軟件(如適用),保持其最佳性能。
不同型號(hào)的賽默飛梯度 PCR 儀在操作上可能會(huì)有細(xì)微差異,具體操作請(qǐng)參考相應(yīng)儀器的用戶手冊(cè)。
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