HSF95 Insect Cell Medium（CW003）昆蟲細胞培養基產品說明書

一、產品基本信息

產品名稱：HSF95 昆蟲細胞培養基

產品貨號：CW003

產品規格：1L

適用范圍：sf9、High Five 等昆蟲細胞懸浮培養及桿狀病毒載體系統（BEVS）的重組蛋白瞬時表達

二、產品描述

CW003 培養基為無血清即用型全營養培養基，專為昆蟲細胞懸浮培養設計，包含細胞生長所需的氨基酸、維生素、碳水化合物、微量元素及特殊促生長因子，無需額外添加血清或其他成分即可直接使用，適用于細胞馴化、高密度培養及工業化生產場景。

三、產品特點

1. 無血清配方：排除動物源成分干擾，批次穩定性優異，符合生物制藥的安全性要求

2. 即開即用：預優化全成分體系，無需補加任何試劑，顯著降低操作復雜度

3. 高效馴化：支持昆蟲細胞從貼壁到懸浮、或從其他培養基直接 / 漸進式馴化，馴化成功率＞95%

4. 高密度支持：細胞峰值密度可達

1.5×107cells/mL

以上（優化培養條件下）

5. 表達增強：與桿狀病毒感染兼容，重組蛋白產量較傳統培養基提升 30-50%

四、基礎參數

五、使用方法

5.1 細胞馴化與傳代

5.1.1 基礎培養條件

• 溫度：27±0.5℃

• 搖床配置：帶擋板搖瓶，轉速 110-130 rpm，裝液量≤30% 瓶體積

• 傳代密度：

0.8?1.2×106?′?c???eˋ??/mL

（臺盼藍染色計數）

5.1.2 直接馴化（適用于懸浮適應細胞）

1. 按常規傳代比例（如 1:3 稀釋）直接用 CW003 培養基替換原培養基

2. 維持培養條件不變，連續傳代 2-3 次即可完成適應

5.1.3 漸進式馴化（適用于貼壁細胞或敏感細胞）

1. 起始階段：原培養基中復蘇細胞，連續傳代 2-3 次至對數生長期（活力＞95%）

2. 混合過渡：

• 第 1 代：原培養基: CW003 = 75:25，細胞密度

0.8×106cells/mL

• 第 2 代：比例調整為 50:50，密度

1.0×106cells/mL

• 第 3-4      代：比例提升至 10:90，密度

1.1×106cells/mL

，每 48 小時傳代

3. wan全適應：過渡至 100% CW003 培養基，連續傳代 3 次，若細胞倍增時間＜24 小時且活力＞92%，馴化完成

5.2 細胞復蘇

1. 快速解凍：從液氮中取出凍存管，37℃水浴震蕩，120 秒內完成解凍（殘留少量冰晶時停止）

2. 換液操作：

• 將細胞懸液轉入 50mL 離心管，加入 10mL 預熱（27℃）的 CW003 培養基

• 離心條件：175×g，5 分鐘，棄上清

• 用      20-30mL 預熱培養基重懸，接種至搖瓶，初始密度

0.3?0.5×106cells/mL

5.3 細胞凍存

1. 細胞篩選：選擇對數生長期（活力＞98%）、密度

2.0?2.5×106cells/mL

的細胞

2. 凍存液配制（現用現配）：

• 45% 新鮮 CW003 培養基 + 45% 細胞培養上清 + 10% DMSO（體積比）

• 混勻后      4℃預冷，避免長時間存放

3. 操作步驟：

• 離心收集細胞：175×g，5 分鐘，棄上清

• 用預冷凍存液重懸至密度

1.0?2.0×107cells/mL

（推薦

2.5×107cells/mL

）

• 分裝至凍存管（1mL / 支），標注信息后放入 4℃預冷的程序降溫盒（含異丙醇）

• -80℃過夜（降溫速率 1℃/ 分鐘），次日轉入液氮保存

六、注意事項

1. 無菌操作：所有操作需在生物安全柜中進行，避免交叉污染

2. 培養基管理：開封后需避光儲存，避免反復凍融；使用前需平衡至室溫（20-25℃）

3. 過程監控：高密度培養時建議每 24 小時監測細胞密度、活力及 pH 值，必要時進行補料或氣體調節

4. 病毒感染：桿狀病毒感染前建議將細胞密度調整至

1.0?1.5×106cells/mL

，MOI 值根據具體蛋白優化

七、質量保證

本產品經嚴格質檢，包含以下檢測項：

• 無菌檢測（細菌、真菌、支原體）

• 內毒素檢測（≤10 EU/mL）

• 細胞增殖測試（sf9 細胞倍增時間＜22 小時）

• 表達兼容性測試（GFP 蛋白表達效率＞90%）