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常見細(xì)胞培養(yǎng)問題溯源:如何判斷是培養(yǎng)基問題?

來源:鏡像綺點(diǎn)(上海)細(xì)胞技術(shù)有限公司   2025年07月21日 11:51  
   細(xì)胞培養(yǎng)過程中,培養(yǎng)基質(zhì)量直接影響細(xì)胞生長狀態(tài)。若出現(xiàn)細(xì)胞貼壁率低、增殖緩慢、形態(tài)異常或死亡等現(xiàn)象,可通過以下步驟系統(tǒng)排查是否由培養(yǎng)基問題導(dǎo)致:
  1.基礎(chǔ)成分驗(yàn)證
  核心成分缺失:檢查培養(yǎng)基是否含必需氨基酸(如谷氨酰胺)、維生素(如維生素B12)、無機(jī)鹽(如鈣、鎂)及葡萄糖。例如,DMEM基礎(chǔ)培養(yǎng)基需額外添加10%胎牛血清(FBS)提供生長因子,若未補(bǔ)充會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞代謝停滯。
  pH與滲透壓異常:正常培養(yǎng)基pH應(yīng)為7.2-7.4,滲透壓280-320mOsm/kg。使用pH試紙或滲透壓儀檢測(cè),若偏離范圍會(huì)破壞細(xì)胞膜穩(wěn)定性,引發(fā)死亡。
  2.污染與降解排查
  微生物污染:觀察培養(yǎng)基是否渾濁、有沉淀或異味。支原體污染(無可見癥狀)需通過PCR檢測(cè)或熒光染色確認(rèn),其會(huì)競(jìng)爭(zhēng)營養(yǎng)物質(zhì)導(dǎo)致細(xì)胞生長抑制。
  氧化降解:培養(yǎng)基中的谷氨酰胺易分解產(chǎn)生氨,積累至2mM即可毒害細(xì)胞。若培養(yǎng)基呈黃色(酚紅指示劑變色)或聞及氨味,需立即更換。
  3.批次與儲(chǔ)存問題
  批次差異:同一品牌不同批次培養(yǎng)基可能因原料純度波動(dòng)影響細(xì)胞生長。建議保留舊批次作為對(duì)照,若新批次導(dǎo)致細(xì)胞狀態(tài)下降,需聯(lián)系供應(yīng)商提供質(zhì)檢報(bào)告。
  儲(chǔ)存條件:未開封培養(yǎng)基應(yīng)避光保存于2-8℃,開封后需分裝并于4周內(nèi)用完。反復(fù)凍融會(huì)破壞血清中的生長因子,導(dǎo)致細(xì)胞貼壁失敗。
  4.對(duì)照實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證
  平行培養(yǎng):設(shè)置對(duì)照組(使用已知正常的培養(yǎng)基)與實(shí)驗(yàn)組(問題培養(yǎng)基),觀察細(xì)胞生長差異。若對(duì)照組細(xì)胞正常增殖而實(shí)驗(yàn)組停滯,可確認(rèn)培養(yǎng)基問題。
  成分替換:逐步替換培養(yǎng)基中的血清、抗生素等添加劑,定位具體污染或降解成分。
  通過系統(tǒng)排查成分、污染、批次及儲(chǔ)存環(huán)節(jié),可快速鎖定培養(yǎng)基問題根源,保障細(xì)胞培養(yǎng)穩(wěn)定性。

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