細胞轉(zhuǎn)染方法

來源：上海滬鼎生物科技有限公司 2025年07月29日 10:58

一、轉(zhuǎn)染基礎(chǔ)概念

細胞轉(zhuǎn)染是將外源核酸（DNA/RNA）導(dǎo)入真核細胞的技術(shù)，分為瞬時轉(zhuǎn)染（外源基因短期表達）和穩(wěn)定轉(zhuǎn)染（基因整合至基因組長期表達）兩類。核心應(yīng)用包括基因功能研究、蛋白表達及基因治療開發(fā)。

二、常用轉(zhuǎn)染方法對比

三、標準化操作流程（以脂質(zhì)體法為例）

細胞準備：接種對數(shù)生長期細胞，密度達70%-90%匯合。

復(fù)合物制備：

無血清培養(yǎng)基稀釋質(zhì)粒DNA與轉(zhuǎn)染試劑（如Lip2000）。

室溫靜置15分鐘形成DNA-脂質(zhì)體復(fù)合物。

轉(zhuǎn)染執(zhí)行：

移除原培養(yǎng)基，加入復(fù)合物輕搖混勻。

4-6小時后更換含血清完-全培養(yǎng)基。

結(jié)果檢測：24-72小時通過熒光顯微鏡或Western Blot驗證表達。

四、關(guān)鍵注意事項

血清干擾：轉(zhuǎn)染階段需使用無血清培養(yǎng)基（如Opti-MEM）。

細胞狀態(tài)：優(yōu)先選擇傳代次數(shù)少、活力>90%的細胞。

毒性控制：脂質(zhì)體與DNA比例需預(yù)實驗優(yōu)化（推薦1:1至3:1）。

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