一、產品信息

平臺編號：Bio-135678

規格：5×10?Cells/T25培養瓶

細胞信息：原代細胞

細胞名稱：人原代Treg細胞

用途：研究

注意事項：僅用于科學研究或者工業應用等非醫療目的不可用于人類或動物的臨床診斷或治療，非藥用，非食用（產品信息以出庫為準）

二、細胞詳述

調節性T細胞（Treg）是具有免疫調節活性的T細胞亞群，在維持機體的免疫耐受以及調控免疫應答過程中發揮重要作用。Treg細胞通過其表面表達一致性分子，分泌抑炎性細胞因子，直接發揮細胞毒作用以及改變抗原呈遞細胞的抗原提呈功能而發揮免疫調節作用。

CD4+CD25+Foxp3+Treg細胞屬于CD4+T細胞亞群，占正常人外周血及脾臟組織中的CD4+T細胞的5%-10%。

三、細胞特性

1）細胞來源于外周血。

2）細胞鑒定：CD4和CD25免疫熒光染色為陽性。

3）經鑒定細胞純度高于90%。

4）不含有 HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌。

5）細胞生長方式：懸浮培養。

四、產品的運輸和保存

視天氣狀況和運輸距離遠近，公司與客戶協商后選擇下述方式中的一種進行。

1)1mL凍存細胞懸液裝于1.8ml的凍存管中，置于裝滿干冰的泡沫保溫盒中進行運輸；收到細胞后請盡快解凍復蘇細胞進行培養，如無法立刻進行復蘇操作，凍存細胞可在-80℃的條件下保存1個月。

2)T-25培養瓶充滿培養基后進行常溫運輸；收到細胞后請鏡下觀察細胞生長狀態，如鋪瓶率超過85%請立即進行傳代操作，如懸浮的細胞較多，請將培養瓶至于培養箱中靜置過夜以幫助未死亡的懸浮細胞能夠再次貼壁。

五、產品使用

1)本產品僅能用于科研

2)本產品未通過直接用于活體動物和人的審核

3)本產品未通過用于活體診斷的審核

六、接受后的處理方法

1)收到細胞后,請檢查是否漏液 ,如果漏液,請拍照片發給我們。

2)請先在顯微鏡下確認細胞生長 狀態,去掉封口膜并將T25瓶置于37℃培養約2-3h。

3)棄去T25瓶中的培養基,添加 6ml本公司附帶的培養基。

4)如果細胞密度達80%-90%請及時進行細胞傳代,傳代培養用6ml本公司附帶的培養基。

5)接到細胞次日,請檢查細胞是否污染,若發現污染或疑似污染,請及時與我們取得聯系。

七、細胞培養步驟

1、培養基及培養凍存條件準備：

1）準備DMEM培養基；優質胎牛血清，10%；雙抗，1%。

2）培養條件：氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。溫度：37℃，培養箱濕度為70%-80%。

3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現用現配。

2、細胞處理：

1）凍存細胞的復蘇：

將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入到含4-6mL培養基的離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心3-5min，棄去上清液，培養基重懸細胞。然后將細胞懸液加入含6-8ml培養基的培養瓶（或皿）中37℃培養過夜。第二天顯微鏡下觀察細胞生長情況和細胞密度。

2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養。

3）細胞凍存:收到細胞后建議在培養前3代時凍存一批細胞種子以備后續實驗使用。

對于貼壁細胞傳代可以參考以下方法：

1、棄去培養上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。

2、加入0.25％（w/v）胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培養瓶中（T25瓶1-2mL，T75瓶2-3mL），置于37℃培養箱中消化1-2分鐘（難消化的細胞可以適當延長消化時間），然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養瓶后加入3-4ml含10%FBS的培養基來終止消化。

3、輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心3-5min，棄去上清液，補加1-2mL培養液后吹勻。將細胞懸液按1：2的比例分到新T25瓶中，添加6-8ml按照說明書要求配置的新的培養基以保持細胞的生長活力，后續傳代根據實際情況按1:2~1:5的比例進行。

下面T25瓶為例；

1、細胞凍存時按照細胞傳代的過程收集消化好的細胞到離心管中，可使用血球計數板計數，來決定細胞的凍存密度。一般細胞的推薦凍存密度為1×106~1×107個活細胞/ml.

2、1000rpm離心3-5min，去掉上清。用配制好的細胞凍存液重懸細胞，按每1ml凍存液含1×106~1×107個活細胞/ml分配到一個凍存管中將細胞分配到凍存管中，標注好名稱、代數、日期等信息。

3、將要凍存的細胞置于程序降溫盒中，-80度冰箱中過夜，之后轉入液氮容器中儲存。同時記錄好凍存管在液氮容器中的位置以便后續查閱和使用。

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