人 S100 鈣結合蛋白 A4(S100A4)是 S100 蛋白家族的重要成員,因能與鈣離子結合而得名。其基因定位于人類特定染色體上,編碼的蛋白質由特定數量的氨基酸殘基組成,分子結構中含有兩個 EF-hand 鈣結合結構域,這是其發揮功能的關鍵結構基礎。
S100A4 在人體多種組織和細胞中均有表達,尤其在成纖維細胞、上皮細胞、免疫細胞等中較為常見。在正常生理狀態下,S100A4 的表達水平維持在一定范圍,參與機體的多種生理過程。而在病理狀態下,如腫瘤發生發展、炎癥反應、纖維化疾病等,其表達水平會出現顯著異常。例如,在多種惡性腫瘤(如乳腺癌、結腸癌、肺癌等)中,S100A4 常常高表達,且與腫瘤的侵襲、轉移、預后不良等密切相關,因此成為腫瘤研究和臨床診斷中的重要生物標志物。
生理功能
S100A4 在人體中具有多樣的生理功能,涉及細胞的多種生命活動調控。
首先,參與細胞遷移和侵襲。S100A4 可以通過與細胞骨架相關蛋白(如肌動蛋白、微管蛋白等)相互作用,調節細胞骨架的重組,從而影響細胞的形態和運動能力。在腫瘤細胞中,高表達的 S100A4 能增強腫瘤細胞的遷移和侵襲能力,促進腫瘤的轉移和擴散。
其次,調節細胞增殖和凋亡。S100A4 能夠通過激活或抑制特定的信號通路(如 MAPK、NF-κB 等),參與細胞增殖和凋亡的調控。在不同的細胞類型和生理病理狀態下,其對細胞增殖和凋亡的影響可能不同,例如在某些腫瘤中,它可促進腫瘤細胞的增殖并抑制其凋亡,從而有利于腫瘤的生長。
此外,參與炎癥反應。S100A4 可以作為一種促炎因子,在炎癥部位釋放后,與免疫細胞表面的受體結合,激活免疫細胞,促進炎癥因子(如 IL-6、TNF-α 等)的釋放,放大炎癥反應。同時,它也可能在炎癥的修復過程中發揮一定作用。
同時,S100A4 還與組織纖維化相關。在肝纖維化、肺纖維化等疾病中,S100A4 可促進成纖維細胞的活化和增殖,增加膠原蛋白等細胞外基質的合成,加速纖維化進程。
檢測原理
人 S100 鈣結合蛋白 A4(S100A4)ELISA 試劑盒是基于酶聯免疫吸附試驗(ELISA)原理,專門用于定量檢測人樣本(如血清、血漿、組織勻漿、細胞培養液等)中 S100A4 含量的專業檢測工具。
該試劑盒的檢測原理以抗原與抗體的特異性結合為核心,具體檢測流程如下:試劑盒中的酶標板預先包被了針對人 S100A4 的特異性單克隆抗體。當加入待檢測的人樣本時,樣本中的 S100A4 會與酶標板上包被的抗體發生特異性結合,形成抗原 - 抗體復合物,這一過程通常在 37℃下孵育一定時間,以保證結合充分。
孵育結束后,進行洗滌步驟,將未與包被抗體結合的其他雜質清洗去除,避免干擾后續檢測。接著,向酶標板中加入酶標記的抗人 S100A4 多克隆抗體(常用的標記酶為辣根過氧化物酶),該酶標抗體可與已結合在包被抗體上的 S100A4 發生特異性結合,形成 “包被抗體 - S100A4 - 酶標抗體” 的夾心結構。再次孵育后,進行洗滌以去除未結合的酶標抗體。
隨后,加入底物溶液(如 TMB 底物液),酶標抗體上的酶會催化底物發生顯色反應,生成有色產物。顯色反應的強度與樣本中 S100A4 的含量呈正相關,即樣本中 S100A4 含量越高,顯色反應越強烈,顏色越深。
最后,加入終止液(如硫酸溶液)終止反應,此時反應液顏色會發生變化(通常由藍色變為黃色)。使用酶標儀在特定波長(一般為 450nm)下測定各孔的吸光度(OD 值)。根據試劑盒提供的 S100A4 標準品制作標準曲線,將待檢測樣本的 OD 值與標準曲線進行對比,即可計算出樣本中 S100A4 的具體含量,從而為相關疾病的研究、診斷和治療監測提供依據。
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