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細胞劃痕實驗(Wound Healing Assay)是一種簡單且經典的體外研究細胞遷移能力的方法，通過模擬細胞傷口愈合過程，觀察細胞在二維平面上的遷移行為，廣泛應用于腫瘤轉移、組織修復、藥物篩選等領域。
細胞劃痕實驗實驗優化與注意事項：
減少誤差的關鍵措施
細胞均一性：確保接種時細胞分布均勻，避免局部密度差異。
劃痕一致性：使用劃痕模板或固定槍頭角度，保證劃痕寬度一致。
邊緣效應：避免將劃痕靠近培養板邊緣(因氣體交換或溫度差異影響細胞行為)。
重復實驗：每組設置3-5個復孔，獨立重復3次以上，提高數據可靠性。
常見問題與解決方案
細胞脫落：劃痕時力度過大導致細胞剝離 → 改用低血清培養基預處理細胞，增強貼壁性。
劃痕閉合過快/慢：調整細胞接種密度或遷移時間點(如延長觀察至72 h)。
增殖干擾：未完全抑制細胞增殖 → 增加絲裂霉素C濃度或延長預處理時間。
實驗應用與擴展：
基礎研究
腫瘤轉移機制：比較高轉移性癌細胞(如MDA-MB-231)與低轉移性細胞(如MCF-7)的遷移能力。
信號通路研究：通過抑制劑(如EGFR抑制劑厄洛替尼)或基因敲除(如RhoA siRNA)驗證特定通路對遷移的影響。
藥物篩選
抗遷移藥物開發：篩選抑制腫瘤細胞遷移的化合物(如天然產物槲皮素)。
促愈合藥物評估：測試生長因子(如EGF)或中藥提取物對傷口愈合的促進作用。
技術擴展
3D劃痕實驗：在Matrigel或膠原凝膠中構建三維環境，更貼近體內遷移條件。
共培養系統：研究免疫細胞(如巨噬細胞)與腫瘤細胞的相互作用對遷移的影響。
活細胞成像：使用時間 lapse 顯微鏡動態追蹤細胞運動軌跡，分析遷移方向性。
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