酶聯免疫吸附測定(ELISA)是一種廣泛應用的免疫學檢測技術,用于定性和定量檢測生物樣品中的抗體或抗原。其原理是將抗原-抗體反應的特異性與酶催化作用的高效性相結合,通過酶作用于底物后產生的顯色反應來判定結果。ELISA檢測方法主要有四種類型:直接法、間接法、雙抗體夾心法和競爭法。
l 直接ELISA:這種類型主要用于檢測抗原。抗原被固定在酶標板上,然后加入特異性抗體和酶標記的二抗,通過底物顯色來檢測抗原的存在。直接ELISA操作簡單,但信號放大效應有限,敏感性不如其他類型。
l 間接ELISA:這是檢測抗體的常用方法。
1、固相抗原包被:將已知抗原固定在酶標板的孔中,形成固相抗原。
2、待測抗體結合:將待測樣本(含有待檢抗體)加入孔中,抗體與固相抗原結合。
3、洗板:洗滌以去除未結合的抗體。
4、加入酶標二抗:加入酶標記的二抗,該二抗能特異性結合到一抗上。
5、洗滌:再次洗滌以去除未結合的二抗。
6、底物顯色:加入酶作用的底物,底物在酶的作用下產生顏色變化。
7、結果讀取:通過酶標儀在特定波長下讀取OD值,OD值與待測抗體的量成正比。
l 雙抗夾心ELISA:這種類型用于檢測抗原,通過兩種特異性抗體夾住待測抗原來進行檢測。雖然理論上可以用來檢測抗體,但實際應用中很少使用,因為制備兩種特異性抗體的難度較大。
1、固相抗原包被:將已知抗原固定在酶標板的孔中。
2、待測抗體結合:將待測樣本加入孔中,抗體與固相抗原結合。
3、洗滌:洗滌以去除未結合的抗體。
4、加入酶標抗原:加入酶標記的抗原,該抗原能特異性結合到待測抗體上。
5、洗滌:再次洗滌以去除未結合的酶標抗原。
6、底物顯色:加入酶作用的底物,底物在酶的作用下產生顏色變化。
7、結果讀取:通過酶標儀在特定波長下讀取OD值,OD值與待測抗體的量成正比。
l 競爭性ELISA:主要用于檢測抗原,通過固定抗原和競爭性結合來實現檢測。這種方法的敏感性在低濃度待測抗原時可能不如間接ELISA。
1、固相抗原包被:將已知抗原固定在酶標板的孔中。
待測抗體結合:將待測樣本加入孔中,抗體與固相抗原結合。
2、洗滌:洗滌以去除未結合的抗體。
3、加入酶標抗原:加入酶標記的抗原,該抗原能特異性結合到待測抗體上。
4、洗滌:再次洗滌以去除未結合的酶標抗原。
5、底物顯色:加入酶作用的底物,底物在酶的作用下產生顏色變化。
6、結果讀取:通過酶標儀在特定波長下讀取OD值,OD值與待測抗體的量成正比。
ELISA的優點包括操作簡便、成本相對較低、適用于高通量檢測等。ELISA因其高特異性和靈敏度,廣泛應用于臨床診斷、食品安全、藥物檢測等多個領域,是生物醫學研究中的重要工具。
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