以下是關于鏈霉親和素(SA)修飾150nm金納米顆粒的詳細說明,涵蓋制備、特性及應用:
1. 基本特性
金納米顆粒(AuNPs)核心:
尺寸:150nm(可通過動態光散射DLS或透射電鏡TEM驗證)。
表面等離子共振(SPR):在可見光區(約520-600nm)有強吸收,可用于比色檢測。
穩定性:需表面修飾(如SA)防止聚集,SA提供負電荷增強膠體穩定性。
鏈霉親和素(SA)修飾:
結合位點:每個SA可結合4個生物素分子,實現高密度生物分子偶聯。
偶聯方式:通常通過靜電吸附或共價連接(如羧基-氨基交聯)將SA固定在AuNPs表面。
2. 制備方法
步驟示例:
AuNPs合成:
檸檬酸鈉還原法(適用于小尺寸):需調整方法(如種子生長法)制備150nm AuNPs。
表征:UV-Vis光譜(SPR峰紅移)、TEM(確認單分散性)。
SA修飾:
活化AuNPs:用帶羧基的 linker(如11-巰基十一烷酸,MUA)修飾AuNPs,EDC/NHS活化羧基。
SA偶聯:將SA與活化后的AuNPs孵育(pH 7.4 PBS緩沖液,室溫2小時)。
封閉:加入BSA或乙醇胺封閉未結合位點。
純化:
離心(如10,000rpm, 15分鐘)去除游離SA,重懸于緩沖液(如含0.1% BSA的PBS)。
3. 關鍵質量控制
結合效率:
BCA法:測定上清液中未結合的SA濃度。
SDS-PAGE:驗證SA是否成功偶聯。
功能性測試:
加入生物素化熒光分子(如FITC-生物素),通過熒光顯微鏡或流式細胞儀檢測信號。
4. 應用方向
免疫檢測:
側向層析:作為信號放大標簽,檢測生物素化抗體(如新冠病毒抗原檢測)。
ELISA替代:SA-AuNPs增強比色信號,提升靈敏度。
分子診斷:
DNA檢測:結合生物素化探針,用于核酸雜交(如SARS-CoV-2 RNA檢測)。
細胞標記:
靶向標記細胞表面生物素化受體。
藥物遞送:
裝載生物素化藥物,實現靶向釋放(需優化尺寸以穿透血管屏障)。
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