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賽默飛NanoDropOneC操作使用流程

來源:孚約生物科技(上海)有限公司   2025年08月15日 10:29  

賽默飛(Thermo Scientific)NanoDrop One/OneC 微量紫外-可見分光光度計的技術使用說明,涵蓋儀器操作、測量步驟、注意事項及維護要點:


一、賽默飛NanoDrop One C儀器簡介

NanoDrop OneC 是一款用于微量樣本(0.5-2 μL)的紫外-可見分光光度計,無需比色皿,直接測量核酸、蛋白質、細胞培養物等的濃度和純度(如A260/A280比值)。

核心功能:

檢測核酸(DNA/RNA)、蛋白質(Bradford/Lowry/BCA法)、細胞密度(OD600)等。

波長范圍:190-850 nm(紫外-可見光)。

樣本體積:0.5-2 μL(無需稀釋)。


二、操作步驟

1、開機與初始化

開機:連接電源,按下儀器正面電源鍵,啟動配套軟件(NanoDrop One)。

初始化:

打開軟件后,儀器自動進行光源校準和基線校正(約1分鐘)。

確保測量 pedestal(檢測臂)清潔無殘留(用無塵紙蘸蒸餾水擦拭)。

2、選擇檢測模式

在軟件界面選擇檢測類型:

核酸(Nucleic Acid):DNA/RNA濃度(A260)及純度(A260/A280、A260/A230)。

蛋白質(Protein):A280或其他波長(如Bradford法測595 nm)。

其他應用(如OD600、用戶自定義波長)。

3、空白校正

抬起檢測臂,在上下 pedestal 各加1-2 μL空白溶液(如蒸餾水、緩沖液)。

放下檢測臂,點擊軟件中的“Blank”按鈕,完成基線校正。

4、樣本測量

抬起檢測臂,用無塵紙清潔 pedestal。

加1-2 μL樣本至下 pedestal(避免氣泡),放下檢測臂。

點擊“Measure”讀取數據,軟件自動顯示濃度、吸光度和比值。

測量后立即清潔 pedestal,防止交叉污染。

5、數據保存與導出

數據自動保存至軟件,可導出為Excel/CSV格式。

支持生成報告(PDF)或直接打印。


三、關鍵注意事項

1、樣本要求:

樣本需透明、無顆粒(避免散射光干擾)。

高濃度樣本可能導致信號飽和(DNA/RNA > 3700 ng/μL時需稀釋)。

2、清潔維護:

每次測量前后用無塵紙蘸蒸餾水或70%乙醇清潔 pedestal。

避免使用丙酮等腐蝕性溶劑。

3、校準與質控:

定期使用NIST標準參考物質(如SRM 2082)驗證準確性。

若基線漂移,重新執行空白校正。

4、常見問題:

誤差來源:樣本殘留、氣泡、 pedestal 污染。

A260/A280異常:蛋白質污染(比值<1.8)或苯酚殘留(比值>2.0)。


NanoDrop OneC 通過微量樣本快速檢測,適用于實驗室常規濃度分析。操作時需嚴格注意清潔和校準,以確保數據準確性。對于高通量需求,可搭配自動化模塊(如8聯板適配器)。

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