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小鼠Ⅱ型肺泡上皮細胞關鍵特性詳解

來源:武漢普諾賽生命科技有限公司   2025年08月15日 16:36  

核心優勢

  • 功能完整性:保留表面活性物質(二棕櫚酰卵磷脂)分泌能力,完-美模擬體內肺泡生理功能

  • 高純度保障:經SP-C(肺泡表面活性蛋白C)免疫熒光鑒定,純度≥90%,附完整質檢報告

  • 無菌保障體系:通過14天微生物全項檢測(支原體/細菌/真菌),HIV-1/HBV/HCV陰性認證

  • 組織特異性:精準分離自肺泡區域,完整保留Ⅱ型細胞特征性結構(嗜鋨性板層小體)

關鍵特性詳解

細胞形態與功能

  • 典型立方形或圓形上皮細胞樣結構,頂端突入肺泡腔

  • 胞質內富含嗜鋨性板層小體(直徑0.1-1.0 μm),內含平行排列的板層狀磷脂結構

  • 分泌表面活性物質,降低肺泡表面張力(維持呼氣時肺泡開放,吸氣時防止過度膨脹)

增殖與傳代

  • 可傳代1-2代,建議接種密度為3×10? cells/cm2

  • 具有分化為Ⅰ型肺泡細胞的潛能,可用于肺損傷修復研究

冷凍保存

  • 程序降溫+含DMSO保護液的標準化流程,解凍后細胞活力≥80%

技術創新

雙酶定向消化技術

  • 膠原酶Ⅰ(200U/mL)+ 中性蛋白酶(0.1%)聯合處理

  • 37℃振蕩消化25min,精準分離肺泡上皮層

  • 差速貼壁法去除成纖維細胞污染(貼壁時間差20min)

質量控制

七維質檢體系

  1. 形態學鑒定:倒置顯微鏡觀察典型Ⅱ型細胞特征(泡沫狀胞質、板層小體)

  2. 表面標記檢測:SP-C/Prospero轉錄因子(SP-C是Ⅱ型細胞特異性標記)

  3. 功能驗證:嗜鋨性板層小體電鏡觀察及表面活性物質分泌檢測

  4. 微生物檢測:PCR+培養法雙重驗證無菌狀態

  5. 活力檢測:臺盼藍排除法確保細胞活性

  6. 遺傳穩定性:STR基因型分析排除交叉污染

  7. 交叉污染檢測:ISO認證細胞庫比對確認種屬特異性

應用場景

肺疾病模型構建

  • 肺纖維化模型(TGF-β1誘導)

  • 急性呼吸窘迫綜合征(ARDS)模型(LPS刺激)

  • 表面活性物質功能障礙相關疾病(如新生兒呼吸窘迫綜合征)

藥物開發與毒性測試

  • 表面活性物質替代療法藥物篩選

  • 肺泡上皮屏障通透性改變相關藥物評價

  • 納米顆粒肺部沉積與毒性研究

再生醫學研究

  • 肺損傷修復機制探究(Ⅱ型細胞向Ⅰ型細胞分化)

  • 干細胞分化為肺泡上皮細胞的誘導體系優化

培養體系優化

專用培養基CM-M003

  • 基礎成分:DMEM/F12 + 5%優質FBS(低內毒素)

  • 生長因子:KGF(角質細胞生長因子,10ng/mL)+ EGF(5ng/mL)

  • 保護添加劑:谷氨酰胺(2mM)+ 抗氧化劑(0.5mM)

  • 特殊添加物:1% ITS(胰島素-轉鐵蛋白-硒)

培養建議

  1. 包被處理:鼠尾膠原Ⅰ(2-5 μg/cm2)預處理培養器皿

  2. 換液策略:初始48h靜置培養,之后每2天半量換液

  3. 傳代時機:當細胞融合度達70-80%時,用0.25%胰酶(含EDTA)消化


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