在光學顯微鏡高分辨率成像領域,浸鏡油的應用是實現(xiàn)微米乃至亞微米級樣本精細觀察的重要技術環(huán)節(jié)。11513860--Leica 徠卡顯微鏡鏡油憑借其精確調控的光學參數(shù)、穩(wěn)定的化學性質以及適配多種物鏡的特性,為科研工作者在細胞生物學、材料科學、病理學等研究中提供了可靠的成像質量保障。
一、光學原理與核心作用機制
(一)消除光線折射損耗
11513860--Leica 徠卡顯微鏡鏡油的核心功能基于光的折射原理。在常規(guī)空氣介質中,光線從載玻片進入物鏡時,由于空氣(折射率 n≈1.00)與玻璃(載玻片和物鏡玻璃 n≈1.52)之間存在較大折射率差,會發(fā)生明顯的折射現(xiàn)象,導致部分光線偏離物鏡孔徑角范圍,無法進入物鏡參與成像,從而降低成像分辨率和亮度 。徠卡浸鏡油的折射率經精準調配至與玻璃相近(n≈1.515 - 1.52),將其填充于載玻片與物鏡之間后,光線能夠以近似直線的路徑從樣本穿過載玻片、鏡油直達物鏡,有效減少光線折射損耗,使更多光線進入物鏡,顯著提升成像亮度與對比度 。
(二)提升數(shù)值孔徑(NA)
數(shù)值孔徑是衡量物鏡聚光能力與分辨率的關鍵參數(shù)(公式:NA = n×sinθ,其中 n 為介質折射率,θ 為物鏡孔徑角的一半)。11513860--Leica 徠卡顯微鏡鏡油通過提高介質折射率,直接提升物鏡的數(shù)值孔徑 。以油鏡為例,在空氣介質中其數(shù)值孔徑通常為 0.95 左右,而使用徠卡浸鏡油后,數(shù)值孔徑可提升至 1.2 - 1.4 。更高的數(shù)值孔徑不僅能收集更多光線,還可使物鏡分辨更小的樣本細節(jié)。根據(jù)瑞利判據(jù)(分辨率公式:d = λ / 2NA,其中 d 為可分辨的最小距離,λ 為照明光波長),在固定光源波長條件下,數(shù)值孔徑增大使物鏡能夠分辨的最小距離減小,從而實現(xiàn)更高分辨率的顯微成像,滿足科研中對細胞亞結構、納米材料等精細樣本的觀察需求。
二、化學成分與性能特性
(一)高純度基礎油與添加劑配方
11513860--Leica 徠卡顯微鏡鏡油采用高純度的芳香族碳氫化合物作為基礎油,此類碳氫化合物分子結構穩(wěn)定,具有極低的揮發(fā)性,可有效避免鏡油在使用過程中因揮發(fā)導致的折射率變化,維持成像穩(wěn)定性 。同時,鏡油中添加了特殊的防霧劑和抗氧化劑。防霧劑能夠防止鏡油在使用過程中因溫度變化或樣本水分影響產生霧氣,確保長時間觀察過程中視野清晰;抗氧化劑則可抑制鏡油與空氣接觸發(fā)生氧化反應,延長鏡油使用壽命,減少因氧化變質對光學性能的影響 。
(二)物理化學穩(wěn)定性
該浸鏡油具備出色的物理化學穩(wěn)定性。在溫度適應性方面,可在較寬的溫度范圍(4℃ - 40℃)內保持穩(wěn)定的液態(tài)和光學性能,即使在細胞培養(yǎng)箱內(37℃)或低溫樣本觀察(如 4℃保存的組織切片)場景下,鏡油也不會出現(xiàn)凝固、變稠或折射率顯著改變的情況 。在化學兼容性上,與常見的載玻片清潔劑(如乙醇、異丙醇)、封片劑以及樣本染色劑等化學試劑均無不良反應,不會發(fā)生溶解、沉淀或化學反應,避免對樣本和物鏡造成污染,確保實驗結果的可靠性 。
三、產品性能優(yōu)勢
(一)精準的光學均一性
11513860--Leica 徠卡顯微鏡鏡油在生產過程中經過嚴格的光學均一性檢測。每一批次產品的折射率波動范圍控制在極小區(qū)間(±0.0005),確保不同區(qū)域、不同時間使用的鏡油對光線的折射作用一致 。這種高精度的光學均一性在進行大視野拼接成像或長時間連續(xù)觀察實驗時尤為重要,可避免因鏡油光學性能差異導致的圖像變形、亮度不均等問題,保證獲得穩(wěn)定、高質量的顯微圖像數(shù)據(jù)。
(二)低熒光背景
對于熒光顯微觀察,鏡油自身的熒光特性直接影響檢測靈敏度。11513860--Leica 徠卡顯微鏡鏡油通過特殊的提純工藝和配方優(yōu)化,將自身熒光背景降低水平。在常見的熒光激發(fā)波長范圍(如 488nm、561nm、640nm)下,鏡油產生的自發(fā)熒光強度遠低于樣本熒光信號,幾乎不干擾熒光標記樣本的觀察與定量分析 。在免疫熒光染色、熒光蛋白表達檢測等實驗中,低熒光背景有助于科研人員更清晰地分辨目標熒光信號,準確獲取樣本的熒光強度數(shù)據(jù)。
(三)易清潔性與物鏡保護
使用后,11513860--Leica 徠卡顯微鏡鏡油能夠被常規(guī)的有機溶劑(如二甲苯、無水乙醇)快速溶解并清除。其特殊的分子結構使其在物鏡表面不易殘留,只需使用干凈的擦鏡紙蘸取適量溶劑輕輕擦拭,即可清除鏡油,避免對物鏡造成污染和損傷 。同時,鏡油在使用過程中不會腐蝕物鏡鍍膜,對各類物鏡(如復消色差物鏡、平場物鏡等)的光學涂層具有良好的兼容性,可有效延長物鏡使用壽命,降低科研成本 。
四、實驗應用場景與操作規(guī)范
(一)生物醫(yī)學研究應用
在細胞生物學實驗中,使用 11513860--Leica 徠卡顯微鏡鏡油配合高倍油鏡,可清晰觀察細胞內的線粒體、內質網等亞細胞結構 。例如,在研究細胞自噬過程時,能夠通過高分辨率成像觀察自噬小體的形態(tài)、數(shù)量及分布變化。在病理學領域,對組織切片進行 HE 染色或免疫組化染色后,借助徠卡浸鏡油可更細致地分辨細胞形態(tài)、組織結構以及病變特征,為疾病診斷和病理機制研究提供高質量圖像數(shù)據(jù) 。
(二)材料科學觀察應用
在材料科學研究中,11513860--Leica 徠卡顯微鏡鏡油適用于觀察納米材料、半導體器件等樣本的微觀結構。對于納米顆粒的尺寸測量、表面形貌分析,以及半導體芯片中電路結構的檢測,高分辨率的光學成像可提供重要的表征數(shù)據(jù) 。例如,在研究二維材料(如石墨烯)的層數(shù)和邊緣結構時,浸鏡油輔助下的顯微鏡成像能夠清晰呈現(xiàn)材料的原子級臺階和缺陷,為材料性能研究和制備工藝優(yōu)化提供直觀依據(jù)。
(三)標準操作流程
使用前準備:在使用 11513860--Leica 徠卡顯微鏡鏡油前,需確保載玻片和蓋玻片表面潔凈無污漬,避免雜質影響成像質量 。同時,將顯微鏡物鏡切換至高倍油鏡(通常為 100×),并調節(jié)載物臺至合適高度,使物鏡接近但不接觸樣本。
添加鏡油:使用移液槍或滴管吸取適量鏡油,滴加 1 - 2 滴于蓋玻片中央樣本區(qū)域上方,緩慢旋轉物鏡轉換器,使油鏡鏡頭浸入鏡油中,確保鏡油在物鏡與蓋玻片之間形成均勻的接觸層 。
觀察與調整:通過微調細準焦螺旋進行對焦,觀察樣本成像效果。若出現(xiàn)亮度不均或模糊現(xiàn)象,可檢查鏡油層是否均勻,必要時補充鏡油或調整物鏡位置 。
使用后清潔:觀察結束后,立即使用干凈的擦鏡紙蘸取二甲苯或無水乙醇,輕輕擦拭物鏡表面殘留的鏡油,直至物鏡清潔干凈 。清潔后,將物鏡轉離載玻片,妥善保存顯微鏡和剩余鏡油。
(四)注意事項
避免交叉污染:不同批次或不同品牌的鏡油可能存在光學性能差異,嚴禁混合使用,防止影響成像效果 。同時,使用過程中需避免鏡油污染樣本,建議采用專用的滴管或移液槍添加鏡油,且每滴加一次更換新的槍頭。
儲存條件:11513860--Leica 徠卡顯微鏡鏡油應儲存于陰涼、干燥、避光的環(huán)境中,避免高溫和陽光直射,防止鏡油氧化變質或揮發(fā) 。儲存溫度建議控制在 10℃ - 25℃,開封后的鏡油需密封保存,盡快使用完畢。
安全防護:鏡油中含有的有機溶劑具有一定毒性和揮發(fā)性,操作時需在通風良好的環(huán)境中進行,佩戴手套和口罩,避免皮膚接觸和吸入揮發(fā)氣體 。使用后的擦鏡紙和廢棄鏡油需按照實驗室危險廢棄物處理規(guī)范進行處置。
11513860--Leica 徠卡顯微鏡鏡油以其科學的光學設計、穩(wěn)定的性能表現(xiàn)和完善的使用規(guī)范,成為光學顯微鏡高倍成像實驗中輔助材料。科研人員通過正確掌握其原理和操作要點,能夠充分發(fā)揮徠卡浸鏡油的性能優(yōu)勢,獲取高質量的顯微圖像數(shù)據(jù),推動生命科學、材料科學等領域的研究進展。