細胞能量代謝服務Seahorse XF實驗---（常見問題及解答）

01. 是否可以使用過期或重復使用的探針板？

解答：安捷倫無法保證使用過期或重復使用探針板的實驗數據有效性。為確保數據真實可靠，請使用在有效期內的探針板及配套耗材。

02. 探針板水化時間超過建議時長如何處理？

解答：安捷倫建議將探針板置于 37℃無 CO?培養箱中過夜水化以獲得最佳效果（最短水化時間為 12 小時）。若需延長水化時間（最長 72 小時），需定期補充或更換校準液，并在培養箱中放置水盤維持濕度，避免液體蒸發。

03. 不同 Fluxpak 探針板的區別是什么？

解答：探針板是 Fluxpak 的核心組件，每套 Fluxpak 包含探針板、水化板、校準液和細胞培養微孔板，具體配置因型號而異。探針板不可單獨訂購，需通過購買 Fluxpak 獲取，而細胞培養板和校準液可單獨采購。訂購前請確認儀器型號及實驗次數，選擇配套的 Fluxpak。

04. 實驗前一天需要做哪些準備？

解答：實驗前一天需完成以下操作：

1. 開機并啟動 Wave 軟件，確保儀器與軟件連接（狀態顯示為      "Connected"）；

2. 對探針板進行水化處理；

3. 提前將貼壁細胞接種至 Seahorse 細胞培養板。

05. 探針板水化是否需要分兩步進行？

解答：是的。對于 96 孔探針板，建議采用兩步法水化：

• 實驗前一天用無菌水水化；

• 實驗當天棄去無菌水，更換為 37℃預熱的校準液，再孵育 1 小時，可zui大程度減少探針頭氣泡。
       24 孔探針板可一步法水化，但建議使用前手動排除氣泡。

06. 能否僅使用探針板的部分孔位？

解答：為確保藥物成功注入細胞孔，建議水化整個探針板，并按字母標識（如 A、B、C、D 組）對所有加藥孔統一加樣。背景校正孔的加藥孔也需加入等量液體，否則可能導致加藥失敗。

07. 為何必須設置背景校正孔？

解答：背景校正孔用于排除溫度、緩沖能力等非代謝因素對氧含量和 pH 測量的干擾，同時可監測整板溫度波動，輔助排查實驗異常原因。

08. 如何設置背景校正孔？

解答：背景校正孔除不接種細胞外，其余操作與細胞孔一致：

• 96 孔板：設置為 4 個角孔（A1、A12、H1、H12）；

• 24 孔板：設置為（A1、B4、C3、D6）；

• 孔內僅加入培養液（無細胞）。

09. 為何細胞培養板需在 37℃無 CO?培養箱中放置 45-60 分鐘？

解答：目的是使培養液脫氣并釋放 CO?，避免干擾細胞外酸化率（ECAR）的測量。

10. 能否通過增加細胞接種量提高檢測信號？

解答：需優化細胞密度，建議接種密度以覆蓋培養板底部 80%-90% 面積為宜。可設置密度梯度預實驗確定最佳值。細胞過密會導致微環境中氧氣快速耗盡，影響數據準確性。

11. Seahorse 實驗的細胞接種方法與常規培養有何不同？

解答：使用安捷倫細胞培養板時，需注意：

• 加樣時槍頭與孔壁呈 45° 角貼壁加入，加樣后靜置 1 小時促進細胞均勻分布，減少邊緣效應；

• 96 孔板每孔接種體積 80 μL；

• 24 孔板分兩步加樣：先加 100 μL 細胞懸液，待細胞貼壁后補加 150 μL 培養基至總體積 250 μL，避免沖散貼壁細胞。

12. 使用細胞黏附劑處理培養板是否影響實驗結果？

解答：不影響。經 poly-L-Lysine、fibronectin、Gelatin 等黏附劑處理的培養板，不會干擾 XF 儀器對代謝參數的測量。

13. XFp/XFe96 細胞培養微孔板的孔體積和底面積是多少？

解答：最大體積 275 μL，底面積為標準 96 孔板的 40%（0.11 cm2）。

14. XFe24 細胞培養微孔板的孔體積和底面積是多少？

解答：最大體積 1000 μL，底面積與標準 96 孔板相同（0.28 cm2）。

15. 檢測液中是否需要添加抗生素？

解答：無需添加。多數 XF 實驗可在數小時內完成，無需抗生素維持無菌環境。

16. 能否在檢測液中添加血清（如 FBS）？

解答：不建議添加。血清會降低檢測液緩沖能力，可能與藥物發生非特異性結合，且易產生氣泡，導致加藥失敗或數據偏差。

17. 檢測液和藥物能否提前配制？

解答：檢測液需實驗當天現配，藥物需現用現溶，剩余溶液不可重復使用。

18. 糖酵解壓力試劑盒中的藥物狀態異常（如 2-DG 呈固體或混合態）是否影響質量？

解答：不影響。例如 2-DG 可能以透明液體、白色固體或固液混合態存在，均屬正常現象，可按說明書溶解使用。

19. 使用 pH 7.4 的 XF DMEM/RPMI 基礎培養基配制檢測液時，是否需要調整 pH？

解答：無需調整。XF 配套底物可確保培養基終 pH 值準確（7.4±0.1）。非 XF 品牌的補充劑可能影響 pH 穩定性，需謹慎使用。開封后的基礎培養基建議 1 個月內用完，避免因吸收空氣中 CO?導致 pH 波動。

20. Seahorse 基礎培養基與其他品牌有何差異？

解答：XF 培養基專為代謝檢測優化，特點包括：

• 無碳酸氫鹽、低緩沖容量，便于 ECAR 檢測；

• 無預添加底物，適應多樣化實驗需求；

• 低酚紅或無酚紅，避免干擾 pH 測量。

21. 進行脂肪酸氧化（FAO）實驗時，能否通過探針板自動注射 BSA - 棕櫚酸酯？

解答：建議將 BSA - 棕櫚酸酯等底物預先加入培養基處理細胞。如需上機時注射此類底物（如血清、脂質復合物），請聯系安捷倫技術支持確認可行性。

22. 為何不能使用含酚紅的 XF 基礎培養基進行糖酵解速率（Glycolytic rate）和實時 ATP 速率（real-time ATP rate）實驗？

解答：酚紅會干擾這兩項實驗中 pH 變化的準確測量，需使用無酚紅培養基。

23. 能否用 GlutaMAX 替代谷氨酰胺（Glutamine）？

解答：不建議。GlutaMAX 需經細胞轉化為谷氨酰胺，可能影響線粒體對谷氨酰胺氧化的動力學分析，建議直接使用谷氨酰胺配制檢測液。

24. 檢測液 pH 對實驗結果的影響有多大？

解答：至關重要。XF 實驗通過監測氧消耗和質子釋放（OCR/ECAR）反映代謝活動，檢測液 pH（37℃時需維持 7.4±0.1）直接影響代謝物的解離狀態和測量準確性。

25. FluxPak 中的水化板能否替代細胞培養板？

解答：不能。水化板與細胞培養板結構相似，但僅用于探針板水化，不可用于細胞培養。

26. 探針板加藥時需注意哪些細節？

解答：

• 加藥時槍頭與加藥孔壁呈 45° 角貼壁注入，保持板子水平，避免液體漏入水化板；

• 24 孔板加藥前需移除粉色水化輔助板；

• 加藥后避免晃動探針板。

27. 細胞板上機時的操作要點？

解答：將探針板和細胞板按 A1 孔朝向儀器內部的方向放入卡槽，確保蓋子已移除，避免遮擋檢測探頭。

28. 代謝數據如何通過 Seahorse XF 報告生成器計算？

解答：各試劑盒對應的《Seahorse XF 報告生成器用戶指南》中詳細列出了計算公式，請參考說明書操作。

29. Wave 數據分析軟件是否可免費下載安裝？

解答：是的，可在安捷倫（鏈接）免費下載并安裝。

30. 儀器模板庫中缺少目標試劑盒的模板怎么辦？

解答：可通過 Wave 軟件將實驗模板導出至 U 盤，再導入儀器模板庫中。

31. 軟件導出選項中無對應 Report Generator 怎么辦？

解答：請至安捷倫 “細胞分析軟件” 欄目下載最新 Wave 軟件，或在對應試劑盒頁面下載專用 Report Generator（下載鏈接）。

32. Wave 軟件無法安裝時如何處理？

解答：可使用 Seahorse Analytics 云分析平臺（鏈接），通過網頁端安全存儲、訪問和分析數據，簡化流程。

33. 實驗數據是否需要歸一化處理？常用方法有哪些？

解答：歸一化是數據解析的關鍵步驟，需根據細胞類型、處理條件等選擇統一參數進行標準化。常用方法包括蛋白定量、細胞成像計數、核 DNA 檢測等。

34. 為何 Fluxpak 包裝中細胞板數量多于實驗需求？

解答：安捷倫考慮到實驗中可能出現細胞密度過高等異常情況，額外配備細胞板以便重新鋪板。

35. Seahorse 相關試劑的存儲條件是什么？

解答：

• 基礎培養基：4℃避光保存，避免凍結；

• FAO 試劑、谷氨酰胺：-20℃凍存；

• 探針板及試劑盒：室溫儲存。

36. 如何獲取 Seahorse 試劑盒說明書？是否有中文版本？

解答：試劑盒標簽上的二維碼可直接掃碼下載電子版說明書。部分試劑盒提供中文說明書，可聯系技術支持索取。

37. 簡述 Seahorse XFe24 組織胰島板的特點？

解答：僅 24 孔機型配備組織胰島微孔板，特點包括：

• 腔室容積 16.6 μL；

• 網狀捕獲篩孔徑 125 μm，適用于胰島等組織樣本。

38. 如何快速判斷實驗數據是否可靠？

解答：參考正常范圍值：

• 24 孔板：基礎 OCR 50-400 pmol/min，基礎 ECAR 20-120 mpH/min；

• 96 孔板：基礎 OCR 20-160 pmol/min，基礎 ECAR 10-90 mpH/min。

39. 24/96 孔微孔板的物理參數對比