【摘要】  目的 了解ELISA在干、濕孵育條件下的試驗結果。方法 設定4種干、濕孵育條件，以雙抗體夾心法測定不同濃度HBsAg血清樣品OD值。結果 結果顯示HBsAg濃度較高時，在不同孵育條件下，OD值差異不大，濃度較低時則有明顯區別。結論 ELISA在濕孵育條件結果更可靠。

【關鍵詞】  ELISA;濕孵育條件;OD值

ELISA因其結果穩定、實驗條件相對要求較低，廣泛應用于多種血清學指標檢測，在基層實驗室普及很廣。目前市售試劑盒配置齊全，只要操作人員加樣準確，按試劑盒要求操作，一般較高濃度樣品均能得到滿意結果。但對于低濃度或處于臨界值樣品，孵育條件對結果的準確性可能有影響。為此，筆者設定了4組干、濕孵育條件，選擇不同濃度HBsAg樣品進行ELISA試驗，觀察各樣品OD值，以遴選出*孵育條件。

    1  材料與方法

    1.1  材料  HBsAg血清樣品來自本院門診病人。ELISA法HBsAg檢測試劑盒，由上海科華生物實業有限公司生產，批號20080810，效期半年。德國HUMAN2000型酶標儀。

    1.2  方法

    1.2.1  樣品準備  將金標法測得HBsAg陽性的多份病人血清樣混合均勻，以生理鹽水稀釋成6個不同濃度樣品后備用。

    1.2.2  孵育條件  設4組孵育條件。（1）抗原抗體結合反應和顯色反應均在37℃濕盒中（濕式）中孵育；（2）抗原抗體結合反應在37℃濕盒中（濕式）中孵育；顯色反應在37℃培養箱（干式）中孵育；（3）抗原抗體結合反應在37℃培養箱（干式）中孵育，顯色反應在37℃濕盒中（濕式）中孵育；（4）抗原抗體結合反應和顯色反應均在37℃培養箱（干式）中孵育。抗原抗體結合反應時間均為30min，顯色反應時間均為20min。

    1.2.3  實驗操作  加樣、洗板、酶標儀讀數、結果判定參考《臨床檢驗管理與技術規范》［1］及試劑盒使用說明書操作。

    2  結果

    6份血清樣品及陰性、陽性對照顯色后按規定各加50μl終止液，振蕩均勻置酶標儀上，以450/630nm雙波長讀取OD值。陰性對照以0.05計， 臨界值=0.05×2.1，測定管OD/臨界值≥1為HBsAg陽性，反之陰性。4種孵育條件各孔OD結果見表1。結果顯示5#血清在第3組、第4組條件下HBsAg陰性，第1組、第2組條件下HBsAg陽性。表1  4種孵育條件下ELISA測定不同濃度HBsAg OD值

    3  討論

    抗原抗體和酶促反應有許多影響因素，溫度是重要因素之一，在反應達到zui適溫度前，反應速率與溫度增加呈正比關系。目前，IFCC和我國臨床生化檢驗中推薦溫度為37℃［2］，同時為保證測定結果的準確性，要求誤差不能大于±0.5℃。在酶免反應中，酶標板各孔內及孔間升溫達到37℃需要一定時間，如果傳熱媒介不同，升降溫速率則不同，結果將產生差異。從本文的試驗結果看，濕式孵育優于干式孵育，特別是對抗原抗體結合階段影響較大，直接影響到低濃度樣品的檢測結果，這可能與水媒介傳熱均勻與快速有關。因此，建議酶免反應盡可能使用水浴箱，要求固相板放入水中，以減少受熱不均。

【參考文獻】
  1 陸永綏,張偉民.臨床檢驗管理與技術規范.杭州:浙江大學出版社,2007，617.

2 周新,涂植光.臨床生物化學和生物化學檢驗.北京:人民衛生出版社,2003，142.