問：

zui近做細胞轉染，預篩選穩定克隆，載體為pEgfp-N1，pIERS

現在是平行做幾個基因，轉然后，只有空載體和一個基因可以看到綠色熒光，其余均沒有，這會是什么原因呢?怎么補救啊?

答：

需要考慮的問題有：

1.你的細胞和轉染的方法，是不是你的細胞本身就很難轉染，有些細胞用脂質體轉染率很低的。在求助時告知細胞和具體的轉染方法和試劑。

2.質粒的純度和質量：看你使用那種試劑盒提取的，我們的經驗是使用Qiagen比國產的一些試劑盒差別很大。

3.pEGFP-N1可用來表達融合蛋白，如果你插入的目的基因帶終止密碼子的話，這時候如果轉讓率很低的話沒有綠色熒光，只有空載有綠色熒光，但是在轉染293T時我們發現帶終止密碼子的載體還可以見到熒光，但比空載明顯弱許多，不像空載體一樣所有的細胞都帶GPF。所以，不知你克隆時目的基因是否帶有終止密碼，如果去掉終止密碼子也要注意是否發生移碼錯位。